Takara PS-GXL比較好用

引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)一些，降低退火溫度，換酶，南京諾唯贊的高保真酶還是很厲害的～要不要試試？

P不出來全長(zhǎng)基因有多方面的原因。
首先需要考慮的是引物設(shè)計(jì)。對(duì)于比較長(zhǎng)的基因，引物設(shè)計(jì)可以多試幾對(duì)（一般設(shè)計(jì)3～4對(duì)，如果自己設(shè)計(jì)有困難可以考慮招公司幫忙設(shè)計(jì)），引物長(zhǎng)度也可以考慮設(shè)計(jì)長(zhǎng)一點(diǎn)（一般不超過35bp）；
其次需要考慮的是用來做模版的cDNA質(zhì)量。模版cDNA的質(zhì)量決定了你能不能最終拿到目的基因；有一些基因的表達(dá)量在不同細(xì)胞里面表達(dá)量不同，可以考慮找一個(gè)表達(dá)量高的細(xì)胞來提取RNA，然后做反轉(zhuǎn)錄得到模版cDNA，然后再去PCR；
再次就是PCR所使用的酶。對(duì)于長(zhǎng)片段而言，也許需要用保真度高的PCR酶，我之前用過NEB公司的高保真酶，效果不錯(cuò)；如果PCR得到是有錯(cuò)誤序列的片段，可以考慮換酶；如果是P到的是其他的片段，有可能是因?yàn)槟０婊蛘咭�物設(shè)計(jì)的問題；
最后需要考慮的是優(yōu)化PCR的程序。這個(gè)需要自己慢慢去摸索，每個(gè)基因有一些特定的程序，我曾經(jīng)P過3k、4k的片段，也是摸索了很長(zhǎng)時(shí)間。退火溫度、延伸時(shí)間以及循環(huán)數(shù)都是要摸索和優(yōu)化的。PCR是一門很大的學(xué)問，能做好PCR實(shí)驗(yàn)，基本上就爬過了生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的第一座大山，其他的實(shí)驗(yàn)會(huì)就會(huì)相對(duì)簡(jiǎn)單一些。最后祝實(shí)驗(yàn)順利，