需要使用NPN來測定細(xì)菌外膜破損情況,在配置NPN溶液時,在加入少量乙醇溶解NPN后,用HEPES/PBS/0.85 %進行稀釋至工作濃度。但是在稀釋過程中,溶液出現(xiàn)乳白色的渾濁,為啥?有什么解決方法嗎? 返回小木蟲查看更多
乙醇溶解NPN之后,當(dāng)時濃度是多少?
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乙醇溶解NPN之后,當(dāng)時濃度是多少?
現(xiàn)在是0.003 g NPN用680微升無水乙醇溶解,再加入10 毫升30 %DMSO,NPN最終濃度為1 mM,現(xiàn)在暫時配置到這里,NPN未出現(xiàn)白色渾濁,之后打算用30 %DMSO稀釋至工作濃度40 微摩。實驗是將細(xì)菌作為處理對象,請問會有影響嗎?這個操作方法對嗎?
懷疑你的NPN工作濃度太高了。
我查文獻看到的NPN工作濃度是10μM。
https://www.nature.com/articles/s41598-017-17772-6
(20μM NPN工作溶液與OD600=1的標(biāo)準(zhǔn)菌液以1:1(v/v)混合)
https://cmdr.ubc.ca/bobh/method/ ... cence-measurements/
(1ml OD600=0.5的標(biāo)準(zhǔn)菌液加入20μl 0.5 mM NPN溶液)
https://www.sciencedirect.com/sc ... i/S0960852414008013
( The fluorescence emission of 3 mL cell suspension with and without sophorolipid mixed with NPN (final concentration of 10 μM) was recorded at the excitation wavelength of 355 nm.)
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40 μM NPN溶液是工作加入時的濃度,實驗終濃度為10 μM。在配置NPN母液(1 mM)時,它會變得渾濁,在稀釋后會成澄清狀態(tài),但是這個渾濁會影響實驗嗎?我實驗結(jié)果前后熒光數(shù)值變化不大,且沒有任何趨勢,為啥呢?請問您做過相關(guān)實驗嗎?想求助一下您。(。・ω・。