由于以蛋白激酶作為靶點(diǎn)的一系列藥物的成功開發(fā)，各個(gè)試劑公司競相開發(fā)相關(guān)的激酶檢測方法和試劑盒，用于篩選和優(yōu)化新的化合物作為新藥候選者。其中以蛋白激酶的生化檢測方法最為繁多，表1給出了一些常用檢測方法、激酶抑制劑篩選服務(wù)以及檢測設(shè)備提供商。

蛋白激酶的生化檢測方法有2種不同的分類：
按照檢測目標(biāo)分類或者按照檢測的方法學(xué)進(jìn)行分類。按照檢測目標(biāo)，可以分為檢測ATP的消耗量、檢測ADP的生成量、檢測多肽底物以及檢測激酶本身；而按照檢測的方法學(xué)分類，則有同位素標(biāo)記分析法、質(zhì)譜、核磁共振、反相高效液相色譜、毛細(xì)管電泳等諸多手段。
雖然上述方法早已經(jīng)見諸報(bào)道并被廣泛應(yīng)用，然而，現(xiàn)在最經(jīng)常使用的還是放射性同位素標(biāo)記ATP，熒光標(biāo)記(包括熒光偏振\熒光共軛能量轉(zhuǎn)移\時(shí)間分辨熒光以及化學(xué)發(fā)光等)檢測方法。這些方法均以微孔板作為載體，具有試劑消耗量低，檢測速度快，通量高的優(yōu)點(diǎn)，成為較普遍應(yīng)用的一些蛋白激酶檢測方法。表2是常見的蛋白激酶生化檢測方法的列舉及優(yōu)缺點(diǎn)比較。

理論上凡是能檢測到磷酸化產(chǎn)物的方法均可用于蛋白激酶的生化活性檢測。但每種檢測方法都需要根據(jù)激酶和底物的性質(zhì)作出相應(yīng)調(diào)整。基于抗體的檢測手段就需要能識(shí)別特定底物的抗體；無活性的激酶不能通過底物量的多少體現(xiàn)活性高低，需要測定與底物的結(jié)合程度；Z’-LYTETM方法只能檢測絲氨酸/蘇氨酸激酶和酪氨酸激酶。在實(shí)際操作中，具體使用哪種方法需要對(duì)每種方法的原理、適用的范圍有充分的了解，再進(jìn)行選擇。


激酶常用檢測方法-1.jpg



激酶檢測方法的優(yōu)缺點(diǎn).jpg 返回小木蟲查看更多