有什么辦法和酶可以防止dUTP擴(kuò)增,而僅擴(kuò)增dNTP
最近想做一個(gè)篩選。
想問(wèn)下大家,有沒(méi)有什么辦法或者酶可以比較高特異性的識(shí)別T堿基和U堿基, 當(dāng)體系中原料是dNTP時(shí)可以正常擴(kuò)增,而換成dUTP時(shí)則無(wú)法擴(kuò)增,當(dāng)然,反過(guò)來(lái)也可以,謝謝!
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最近想做一個(gè)篩選。
想問(wèn)下大家,有沒(méi)有什么辦法或者酶可以比較高特異性的識(shí)別T堿基和U堿基, 當(dāng)體系中原料是dNTP時(shí)可以正常擴(kuò)增,而換成dUTP時(shí)則無(wú)法擴(kuò)增,當(dāng)然,反過(guò)來(lái)也可以,謝謝!
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加入 UNG酶就可以了, 根據(jù)你反應(yīng)溫度,加入耐熱或不耐熱的酶
我估計(jì)你理解錯(cuò)題主的意思了。他應(yīng)該不是想消化掉模板里的dutp。其實(shí)這問(wèn)題很簡(jiǎn)單,使用pfu這類酶,是不能把溶液中的dutp摻入產(chǎn)物的。
請(qǐng)問(wèn)PFU酶可以放到擴(kuò)增體系里嗎? 比如我做普通的PCR或者恒溫?cái)U(kuò)增,如果放入pfu酶,是不是就無(wú)法擴(kuò)增dUTP為原料的體系? 如果是正常的dNTP體系就仍然可以擴(kuò)增
,
你用Taq、Tth、Pfu、KOD這些酶做出來(lái)的才叫PCR,
既然用pfu,又怎么會(huì)能做恒溫?cái)U(kuò)增呢