體外發(fā)酵的厭氧環(huán)境以及菌群問題，求解！
我最近要取人的糞便和我的樣品一起發(fā)酵，測定樣品對菌群多樣性的影響，有一些問題不懂，希望大家?guī)兔獯鹨幌拢兄x！
1. 因為實驗室內(nèi)沒有厭氧工作站，糞便稱量，溶解，用紗布過濾等過程只能在空氣中進行，請問會不會造成菌群的死亡呢？
2. 到了時間，取出的培養(yǎng)液，應該怎么停止反應呢？我看有文獻打開瓶口冷水浴，但如果沒了厭氧環(huán)境菌群就死亡不反應，那我之前的操作不就已經(jīng)造成菌群死亡了嗎？還有的加入乙腈，我不明白這個的原理，以及加乙腈會不會對我后續(xù)提取DNA有影響？
3. 我看的文獻上大多都是，培養(yǎng)液離心，要沉淀，從沉淀里提DNA，再送出去檢測；但我總覺得我的樣品應該不會有很多沉淀，畢竟都是溶于水的東西。也看到過一篇文獻取的上清液；想請問這個的原理是什么呢？
4. 我還要測每個時間點取出的培養(yǎng)液中活性成分含量，這一過程比較糾結計算問題：總共50mL液體（含500mg樣品），每一個時間點取出10mL，比如第一次取出的10mL中，含量為a mg/mL，如果換算成mg/mg，能計算為 a*50/500 嗎？因為不是一個時間點一個管子，而是一個管子往外取，不知道這樣計算準確性可以嗎？
馬上就開始做了，但很害怕因為操作不當，導致菌群都死了，送出去檢測不出結果，還花了一大筆錢，麻煩大家?guī)兔獯鹨幌�，感謝�。�！
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1.糞便里面的菌群有很多種，正常稱量就可以，沒那么容易死，如果擔心，可以放個冰盒，保持低溫稱�。�
2.到了時間停止反應，敞開瓶口冰浴不只是通氧，還有通過低溫使菌體代謝降低而停止反應，如果要后續(xù)提取DNA先要看看你的提取方法對樣品有什么限制，一般冰水浴，保持低溫，盡快提��；
3.你的培養(yǎng)液中最好都是水溶物，因為培養(yǎng)后離心下來的是菌體，正是你要測的菌群；
4.如果能夠保證樣品培養(yǎng)液的均勻，這樣做應該是沒什么問題的，但是你以50mL為基礎量，每次取10mL對你的培養(yǎng)體系影響應該挺大的，可以擴大體系或者減小取樣量會好一點，或者還是統(tǒng)一配制接種后再分裝
你用離心管裝滿液體為什么要躺著放，如果管子里面還有空氣的話這樣不是加大了液面與空氣的接觸范圍嗎；如果你要絕對無氧的環(huán)境的話用厭氧培養(yǎng)箱會方便很多，但是如果不是要絕對無氧的環(huán)境的話就這樣操作，然后盡量排空管內(nèi)空氣，并保證液面面積盡量小，你師姐用針管就是這個道理，你可以試試你的管子不要蓋太緊，用密封厭氧罐加產(chǎn)氣包，配合里面放蠟燭或者可以燃的東西點燃然后密封，可以消耗里面的氧氣
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