用cDNA擴(kuò)增一個(gè)基因，總是擴(kuò)增出帶有內(nèi)含子的片段
各位蟲友，我要擴(kuò)增一個(gè)基因的cDNA序列，擴(kuò)增出來的片段總是帶有內(nèi)含子的。因?yàn)橹白鲞^RACE，知道序列是怎么樣的。要擴(kuò)增基因全長的時(shí)候總是擴(kuò)增出帶有內(nèi)含子的片段。多次提了RNA，并且這些cDNA我也用來擴(kuò)增其他的基因，十幾個(gè)基因都沒有問題，跑膠也沒有看到DNA的條帶，單單這一個(gè)基因擴(kuò)增出來的片段不對。
請問有沒有什么好辦法，原因是什么？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
可能這個(gè)基因的某一個(gè)亞型就是帶有這個(gè)內(nèi)含子片段。換句話說，在某種細(xì)胞中可能這個(gè)內(nèi)含子不被識別出來，存在一個(gè)帶有它的剪切拼接亞型。如果一定要p出來和數(shù)據(jù)庫一樣的序列，要么就換個(gè)細(xì)胞要么就基因合成，現(xiàn)在基因合成也不算貴。
有沒有可能是引物的問題，直接從基因組擴(kuò)增了？
有可能，我考慮下基因合成，多謝
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這個(gè)引物是根據(jù)轉(zhuǎn)錄組和RACE的序列出來的。并且我用的cDNA，不應(yīng)該有基因組DNA的擴(kuò)增啊
這個(gè)引物是根據(jù)轉(zhuǎn)錄組和RACE的序列出來的。并且我用的cDNA，不應(yīng)該有基因組DNA的擴(kuò)增啊