真誠求問各位大佬，
DNA加合物定量方面的問題...
目前知道的有絕對定量和相對定量兩種方式。
絕對定量目前流行的方式是穩(wěn)定同位素稀釋法，即通過已知濃度的同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)樣去定復(fù)雜基質(zhì)中的加合物的絕對含量（其實(shí)具體的計(jì)算方法也是很懵圈）
相對定量有兩種說法，一是算，UV-Vis先測DNA的含量，然后計(jì)算大概有多少個(gè)正常核苷酸，然后通過外標(biāo)法或者內(nèi)標(biāo)法吧，計(jì)算百分比；二是說用LC-MS/MS直接測核苷的響應(yīng)，算出百分比.....（是否是這樣也不清楚...）

小妹真的對這塊真的十分懵圈，實(shí)在是找不到同門問，畢業(yè)在即，痛苦萬分。
而且目前很大的困難是標(biāo)樣不全，要檢測4種加合物并且算它們之間的比值，目前只有2種標(biāo)樣，想了各種方法實(shí)在是能力有限；更別提同位素標(biāo)樣，完全沒有；化合物本身毒性很大，再去標(biāo)樣合成幾乎沒戲......
相對定量是說 我有核苷標(biāo)準(zhǔn)品，然后稱重溶解算濃度，逐級稀釋，用和待測加合物同樣的色譜方法，找母子離子，優(yōu)化它的MRM峰形保留時(shí)間，然后做它的工作曲線，然后之后再做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，水解DNA成核苷，上質(zhì)譜看響應(yīng)，通過工作曲線算出正常核苷的濃度嗎？一般來說都是說XX個(gè)加合物/xx個(gè)正常核苷，這個(gè) 個(gè)是怎么算出來的？ 難道是通過阿佛加德羅常數(shù)嗎... 這樣豈不是誤差非常大？
以及方法學(xué)考察部分，標(biāo)樣不全，能做多少呢？還有可信度嗎？碩士畢業(yè)論文根本實(shí)驗(yàn)都做不全，沒法畢業(yè)也沒法出文章阿。
十分煎熬！
希望有一步步的類似于protocol的教導(dǎo)，萬分感謝！ 返回小木蟲查看更多