更改酶切位點(diǎn)進(jìn)行PCR，然后將PCR產(chǎn)物與載體骨架進(jìn)行連接，獲得改變了酶切位點(diǎn)的載體：
有兩個(gè)問題：以XbaI 為例，酶切位點(diǎn)在CTCGAG的C和T之間，更改酶切點(diǎn)的的時(shí)候，是只在引物一段加上“TCGAG”還是要加上“CTCGAG”，即要不要加酶切位點(diǎn)之前的堿基C？如果是要加C，是不是要對PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，才能獲得切開的粘性末端？如果不加C，PCR產(chǎn)物是完整的雙鏈結(jié)構(gòu)，怎么才能獲得粘性末端？
另外，聽實(shí)驗(yàn)室有人說可以用PCR產(chǎn)物直接連接，請問直接連接是什么意思，就是說，PCR產(chǎn)物直接與酶切的載體骨架進(jìn)行連接嗎，不需要上面說的酶切？那PCR產(chǎn)物是要電泳后回收嗎，還是直接用PCR以后的溶液（不含有Loading Buffer）就可以？@biostar2009@youlinglyw@wizardfan 返回小木蟲查看更多