HRP標記主要采用高碘酸鈉法，HRP的活化過程如下：
①.        稱取HRP酶適量，用純水配置為5mg/ml的HRP液體；
       注：當HRP從-20℃取出后，一定要平衡到室溫，否則HRP凍干品易潮解。稱量時不要用稱量紙，不要用工具取HRP，應將HRP直接小心地倒入要用來溶解HRP的器具中。在倒HRP時，不要在風口（如電風扇風，自然風，呼吸）操作，因為HRP凍干品質(zhì)輕易飛揚；盡量不要說話，以防污染。HRP盡量不要回倒，以防污染。當HRP量小于10 mg時，溶解器具可用干凈Eppendoff tube，HRP量大于10 mg時，則要求用體積稍大的小玻璃瓶。
②.        用新鮮配制的0.1M NaIO4溶液，按每mg HRP酶加入34μl，避光放置4℃放置1hrs；
③.        按每mg HRP酶加入25μl的量加入乙二醇，避光放置4℃，30分鐘；
④.        裝入透析袋中，用1mM醋酸緩沖液（pH4.0~4.4）透析過夜，期間至少換液2次，均要求避光。

目前搞不懂的主要是：
1、HRP活化后為什么需要用pH4.4的乙酸鈉緩沖透析？這一步的作用是什么？
2、HRP活化時加入乙二醇的作用是什么？

希望有高手能解惑。 返回小木蟲查看更多