我的蛋白在表達(dá)后需要用tev酶切除His標(biāo)簽，可是切完后總是切不完，而且切下來的目標(biāo)蛋白好像會(huì)和原蛋白有相互作用，無法再用Ni-NTA分離(切下來的目標(biāo)蛋白已經(jīng)沒有了his標(biāo)簽，卻無法從鎳柱上洗脫下來，之后用凝膠層析也無法將原蛋白和切下來的蛋白分離，SDSPAGE顯示兩種蛋白在同一個(gè)峰里)。
現(xiàn)在我考慮的是兩種方法:
1. 提高tev酶的活性，將原蛋白盡量全部酶切，只剩下目標(biāo)蛋白和切下來的his標(biāo)簽，這樣就能分離出目標(biāo)蛋白。但嘗試很多條件都無法達(dá)到，總是剩下大概一半的蛋白切不動(dòng)。
2. 添加一些試劑破壞原蛋白和目標(biāo)蛋白的相互作用。我的蛋白里有很多二硫鍵，所以試過GSH和GSSG，但沒有用。
大家有沒有什么好方法呢？

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