軟瓊脂克隆形成試驗求助~~~~
請問有哪位 大神做過軟瓊脂克隆形成試驗呀，我根據(jù)步驟做了之后，養(yǎng)了有一個星期了，細胞沒有任何變化，不知道自己哪里出問題了？實驗室里也沒有其他人做過，希望能和有經(jīng)驗的師兄師姐師弟師妹交流一下，不勝感激~~~
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
先確定細胞是不是長起來了，一星期的話應(yīng)該在顯微鏡下可以看到一簇一簇的細胞，一簇至少有五六個的樣子。剛鋪完的時候應(yīng)該都是分散的一兩個細胞。
我現(xiàn)在看到的細胞還是單個的，是不是我在拿的時候得注意一點，要不然會散？
還有就是在晃動的時候上層也會隨著培養(yǎng)基動，這是正常的嗎？
另外在換液的時候槍頭很容易把上層膠弄碎？上層膠我配的是0.7%的濃度，下層配的是1.2%的濃度。
請問你當時做的用的是什么牌子的瓊脂��？
問題有點多，希望不要介意~~·感謝感謝
晃動的時候上層培養(yǎng)基會晃動是正�，F(xiàn)象。換液的時候確實容易把最上層膠弄碎，不過一般不礙事，如果講究的話可以在最上層的上面再鋪一層不帶細胞的軟瓊脂作為保護。
用的是Sigma的低熔點瓊脂，A9045-10G。低熔點的軟瓊脂保證了當溫度降到37度甚至更低的時候，軟瓊脂仍然可以保持液體狀態(tài)一段時間。如果軟瓊脂沒有降到足夠溫度就混合的話會把細胞燙死。
那上層不帶細胞的那層配的時候得濃度應(yīng)該是多少呢？和底層一樣嗎？
我剛查了一下你所用的好像是agarose，但是老師讓我買的是agar，用的也是sigma的。雖然這兩者不太一樣，但感覺好像都能做。
你可以分享一下你當時做這個試驗的protocol嗎？如果不介意的話，這是我的郵箱或者你加我也行，1161780245@qq.com
另外我看到有些文獻里的圖拍出來的背景是白色的，是不是直接把圖片顏色變成黑白的？不知道這個怎么弄
感謝大神的指導~~花花送給你
，