每當(dāng)有人咨詢關(guān)于制備純化問題的時(shí)候，上樣量是最關(guān)注的參數(shù)。在制備純化中的上樣量通常指在確保純度和收率的條件下為了提高效率、降低耗材使用成本而得到的最大制備樣品量。


那么決定制備純化上樣量因素有哪些呢?首先我們這里對上樣量的概念進(jìn)一步細(xì)化成：理論最大上樣量和有效最大上樣量。


理論最大上樣量是指不考慮分離因素，僅僅考慮填料對樣品的承受能力。對于不同色譜填料，構(gòu)成不同、參數(shù)不同、分離作用原理不一樣，單位重量的填料對樣品的分離承受能力也不同。這里我們就拿制備純化最常用的硅膠和硅膠基質(zhì)反相C18的填料進(jìn)行舉例說明。這兩種填料對分離作用影響最大的就是其表面的官能團(tuán)，硅膠填料表面的官能團(tuán)是羥基；硅膠基質(zhì)反相C18的填料表面官能團(tuán)是鍵合的C18基團(tuán)，故而硅膠填料的分離承受能力和單位填料羥基官能團(tuán)的多少有直接關(guān)系，同樣硅膠基質(zhì)反相C18填料的分離承受能力和單位填料C18基團(tuán)的多少有直接關(guān)系。這里通常硅膠的理論最大上樣量是硅膠量的1/10，硅膠基質(zhì)反相C18填料的理論最大上樣量是填料量的1/50。


而在實(shí)際分離過程中有很多因素影響我們上樣情況，因此在實(shí)際分離過程中常用有效最大上樣量，有效最大上樣量是指通過實(shí)驗(yàn)所最終確認(rèn)的制備上樣量。這里就幾個(gè)常見的因素進(jìn)行講解：1、樣品的分離度2、樣品的溶解度。


分離度對上樣量的影響，主要是分離度的好壞決定是否要超載進(jìn)樣。當(dāng)目標(biāo)物和雜質(zhì)分離度很好的情況下，我們就可以加大進(jìn)樣量即超載進(jìn)樣，隨著進(jìn)樣量的增大，分離度變小，直至達(dá)到已經(jīng)影響制備純化得率和純度要求。反之，如果分離度不好，就要酌情降低上樣量來滿足制備純化得率和純度要求。


溶解度對上樣量的影響，主要是溶解度的好壞決定超載進(jìn)樣的方式。超載進(jìn)樣方式一般分為濃度超載和體積超載（如圖1所示）。濃度超載指進(jìn)樣體積不變增加樣品濃度，峰型從高斯曲線對稱變?yōu)槿�角形，峰展寬較小，分離效果較好，因此在樣品溶解性較好的前提下通常采用此種進(jìn)樣方式。而當(dāng)樣品溶解性較差時(shí)，通常增加進(jìn)樣體積，此種進(jìn)樣方式稱為體積超載，當(dāng)超過一定進(jìn)樣體積后，峰高將不再增加，峰型變寬并呈矩形。同時(shí)樣品溶解度差的樣品在分離過程還會(huì)出現(xiàn)析出現(xiàn)象造成柱壓升高從而讓我們不得不降低上樣量。


那么你們在制備分離中還有哪些因素影響我們的上樣量呢，歡迎大家與我們進(jìn)一步的交流。 返回小木蟲查看更多