HPLC:乙腈/水梯度洗脫,乙腈比例增大后吸光度降低。
各位大神,求助HPLC問(wèn)題。
最近用HPLC測(cè)定苯酚,用的Kinetex 5u C18 100A的柱子,安捷倫的機(jī)子。
采用乙腈和水梯度洗脫:0-5 min 乙腈/水=20/80,也是這個(gè)比例調(diào)諧的;5-15 min 乙腈/水=95/5;15-20 min 乙腈/水=20/80。
剛開(kāi)始的時(shí)候運(yùn)行很正常,如圖所示,當(dāng)乙腈比例開(kāi)始增大后UV的吸光度也有一點(diǎn)攀升。但是這周測(cè)試時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙腈比例開(kāi)始增加時(shí),UV的吸光度開(kāi)始變負(fù),而苯酚正常出峰(如圖:不是倒峰),算的濃度也正常。
想咨詢一下各位大神這到底是出了什么問(wèn)題?(壓力正常,柱子也沒(méi)問(wèn)題,拆了柱子空著運(yùn)行時(shí),只要加大乙腈的比例吸光度就開(kāi)始往負(fù)走)同一臺(tái)機(jī)子,用低濃度硫酸做流動(dòng)相測(cè)乙酸是完全正常。
我該怎么辦。
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
乙腈-水體積的基線,和pH有很大關(guān)系。由于波長(zhǎng)較低,造成基線不一致的情況有以下可能:
1. 不同天水的pH不一樣。
2. 之前體系用了具有紫外吸收的流動(dòng)相比如乙酸、甲酸等,體系不干凈,造成基線漂移。估計(jì)你多數(shù)是第二種情況。沖沖系統(tǒng)就好了,
好吧,是水被污染了。雖然說(shuō)還是想不明白為什么什么東西污染了水,跟乙腈混合后能讓吸光度降低