關于FISH的一些疑問
我方向是環(huán)境工程偏微生物(厭氧氨氧化),需要觀察反應器內(nèi)活的厭氧氨氧化細菌隨時間數(shù)量的變化?次墨I的描述,測定的方法是測MLVSS結合live/dead實驗以及FISH實驗,我的問題是:
1)FISH實驗中,能夠與探針原位雜交的細菌只是活的嘛,還是死的活的都能與探針雜交?原理是為什么
2)FISH實驗中為何需要用多聚甲醛等物質(zhì)對細菌進行固定這一步驟?固定是指固定細菌的移動還是形狀還是其它?不固定后果是什么?
望大神解答感激不盡!
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
先回答(2),F(xiàn)ISH的固定步驟主要是為了穩(wěn)定大分子和細胞骨架結構,避免雜交的過程中細胞裂解。參考如下,