細(xì)菌基因敲除的接合篩選
我在做一個(gè)弧菌的基因敲除,使用的是利用自殺質(zhì)粒的雙交換同源重組方法。我將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌和弧菌涂布到雙抗板(弧菌抗氨芐,質(zhì)粒上有卡那的抗性基因)上后,取長(zhǎng)出來(lái)的菌做pcr,引物是融合同源臂兩端的引物,理論上條帶應(yīng)該有兩條,一條是融合同源臂的,一條是上下同源臂間夾著待敲除基因的。但現(xiàn)在只有融合同源臂的條帶,我想請(qǐng)問下大家這是怎么回事,是因?yàn)樽詺①|(zhì)粒選的不好導(dǎo)致它復(fù)制了嗎?急,請(qǐng)求大家的幫助。
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我們也會(huì)這樣,可以挑取做下去試試看,應(yīng)該是問題不大的
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我也遇到相同的問題,樓主解決了嘛?我一直沒法確定是否單交換成功了。