各位老師，我最近做的是用GC-MS對大鼠體內(nèi)游離脂肪酸進(jìn)行一個絕對定量，在用空白血來建標(biāo)曲的時候，我不清楚混標(biāo)液和內(nèi)標(biāo)液啥時候加進(jìn)去，麻煩各位老師幫我看看以下三種方法哪種可行或者說老師能給出更好的方法：
第一種：取100ul空白血清，加入2mL（血清體積的20倍）的氯仿甲醇溶液,超聲30min,取上清液,加入25%的硫酸-甲醇溶液2mL,放在80℃水浴上,甲酯化90min,再加1mL的正己烷萃取,加1.5mL的0.9%NaCl,混勻，吸取上清液600uL,加入15ul混標(biāo)和15μL內(nèi)標(biāo),混勻加入進(jìn)樣瓶,進(jìn)入GC-MS檢測
第二種，取空白血100ul，加入5ul混標(biāo)溶液，混勻，加入氯仿甲醇，超聲30min, 取上清液，加入25%的硫酸-甲醇溶液2mL,放在80℃水浴上,甲酯化90min,再加1mL的正己烷萃取,加1.5mL的0.9%NaCl,混勻，取上清液100ul, 氮氣吹干，100ul正己烷復(fù)溶，并加入5ul內(nèi)標(biāo)
第三種：取空白血100ul, 加入5ul 混標(biāo)，混勻，加入2ml 25%的硫酸-甲醇溶液，放在80℃水浴上,甲酯化90min,取出，冷卻至室溫，加1mL的正己烷和1.5mL的0.9%NaCl,混勻，4000r/min 離心 5min， 取上清液500ul, 氮氣吹干，100ul正己烷復(fù)溶，并加入5ul內(nèi)標(biāo)，混勻，進(jìn)樣
此外，我們做絕對定量的時候，方法學(xué)驗證是否跟LC-MS做藥動一樣，也要做專屬性和精密度和準(zhǔn)確度這些呢？是否有相關(guān)指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)呢？ 返回小木蟲查看更多