看文獻(xiàn),作者研究一個蛋白對病毒滴度的影響,選擇將基因插入到乳糖操縱子模型中,通過IPTG選擇性的表達(dá),他為什么不把這段基因直接敲除呢? 返回小木蟲查看更多
乳糖操縱子在未誘導(dǎo)的情況下還是有一個較低水平的表達(dá)量的
問題描述的有點過于簡單,這個基因是原宿主細(xì)胞內(nèi)的基因么?構(gòu)建乳糖操縱子模型里面是指把該基因克隆至帶有乳糖操縱子的載體,轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞,增加表達(dá)拷貝數(shù)么? 猜測,基因敲除的工作量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于簡單的載體轉(zhuǎn)化,所以擇優(yōu)選擇了后者。 研究一個蛋白對病毒滴度的影響,敲除基因是通過“有”和“無”之間的對比體現(xiàn)實驗結(jié)果。原宿主細(xì)胞內(nèi)IPTG誘導(dǎo)的方式是通過該蛋白“多”和“少”的變化來驗證實驗猜想。兩種思路其實都可以獲得有效的數(shù)據(jù)。 并且,如果不是在原宿主原位驗證,而是異源表達(dá)該蛋白來做驗證,那么IPTG誘導(dǎo)控制也可以實現(xiàn)“有”和“無”的對比實驗效果,
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乳糖操縱子在未誘導(dǎo)的情況下還是有一個較低水平的表達(dá)量的
問題描述的有點過于簡單,這個基因是原宿主細(xì)胞內(nèi)的基因么?構(gòu)建乳糖操縱子模型里面是指把該基因克隆至帶有乳糖操縱子的載體,轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞,增加表達(dá)拷貝數(shù)么?
猜測,基因敲除的工作量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于簡單的載體轉(zhuǎn)化,所以擇優(yōu)選擇了后者。
研究一個蛋白對病毒滴度的影響,敲除基因是通過“有”和“無”之間的對比體現(xiàn)實驗結(jié)果。原宿主細(xì)胞內(nèi)IPTG誘導(dǎo)的方式是通過該蛋白“多”和“少”的變化來驗證實驗猜想。兩種思路其實都可以獲得有效的數(shù)據(jù)。
并且,如果不是在原宿主原位驗證,而是異源表達(dá)該蛋白來做驗證,那么IPTG誘導(dǎo)控制也可以實現(xiàn)“有”和“無”的對比實驗效果,
可以在培養(yǎng)基中加入葡萄糖,抑制lac promoter。