構(gòu)建質(zhì)粒，目的基因前加信號肽導(dǎo)致目的基因缺失或大腸桿菌致死
發(fā)現(xiàn)了有趣的現(xiàn)象
在構(gòu)建質(zhì)粒過程中，在目的基因前加信號肽導(dǎo)致會目的基因序列缺失或大腸桿菌致死，大家有沒有遇到這樣的情況？或者大概分析一下可能是哪些原因呢？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
基因缺失或致死是因為細(xì)胞毒性么？有點(diǎn)好奇是什么基因，分泌到periplasm還是到培養(yǎng)基里？
可能原因很多，比如在胞內(nèi)無法正確折疊，不會致死，但是加了信號肽，能正確折疊了，毒性就出來了，，，
表達(dá)的ccdB毒蛋白基因，這個基因在DB3.1菌株里面是不致死的，但是加了信號肽之后，測序發(fā)現(xiàn)ccdB基因發(fā)生了缺失，那可能是由于信號肽的存在，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)了？
還有就是又克隆了一個普通的酶，以信號肽+酶的形式構(gòu)建質(zhì)粒，這個質(zhì)粒就構(gòu)建不出來了，涂抹到平板上是不長的出現(xiàn)了致死的現(xiàn)象，覺得很奇怪
，
ccdB蛋白的毒性作用是通過與促旋酶GyrA亞基第462位氨基酸相結(jié)合使得DNA斷裂后不能進(jìn)行修復(fù)，DNA合成受阻，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
DB3.1菌株的細(xì)胞含有g(shù)yrA462基因，能夠表達(dá)GyrA亞基蛋白與ccdB結(jié)合的區(qū)域，可以競爭性抑制ccdB蛋白的活性，使得促旋酶可以正常行使功能，實現(xiàn)含有ccdB的載體的正常擴(kuò)增。
-------------------------以上轉(zhuǎn)自豆丁
根據(jù)以上信息, 是不是可以理解為信號肽可能是ccdB蛋白在空間上逃逸GyrA的結(jié)合, 從而致死(這只是推測, 可能性之一吧)