分子伴侶共表達(dá)問題
分子伴侶和融合蛋白是在一個(gè)載體上表達(dá)的，還是另一個(gè)載體上表達(dá)的，還是分子伴侶被融入到基因組中表達(dá)的，不是說兩個(gè)不同的質(zhì)粒在一個(gè)細(xì)菌中表達(dá)不兼容嗎？這又是怎么克服的，難道分子伴侶不是使用PET系統(tǒng)載體構(gòu)建的嗎
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
商業(yè)化的分子伴侶是構(gòu)建在一個(gè)單獨(dú)的質(zhì)粒上的，比如Takara的pG-KJE8、pG-Tf2、pGro7等等。它們的復(fù)制起始位點(diǎn)來自于pACYC。
具有不同復(fù)制子的質(zhì)�？梢栽诩�(xì)胞中穩(wěn)定共存，而具有相同復(fù)制子的不同質(zhì)粒，細(xì)胞就無法對其進(jìn)行區(qū)分識別并在分裂的時(shí)候?qū)深愘|(zhì)粒平均分配到子細(xì)胞中，所以若干代以后某些細(xì)胞就會只有一種質(zhì)粒。但是質(zhì)粒不相容性的定義有一個(gè)前提條件：在沒有選擇壓力的情況下。比如如果兩個(gè)質(zhì)粒帶不同抗性基因，那么即使是同種質(zhì)粒也能在單個(gè)細(xì)胞中共存，因?yàn)樵谶x擇壓力下質(zhì)粒丟失也就意味著被淘汰，所以也能共存并正常表達(dá)雙蛋白。
分子伴侶不適合選用pET系列構(gòu)建，因?yàn)門7系統(tǒng)太強(qiáng)，會過表達(dá)競爭目的蛋白資源，影響目的蛋白表達(dá)量。商業(yè)化的質(zhì)粒一般用araB和Pzt-1啟動子起始轉(zhuǎn)錄，以便于調(diào)控分子伴侶的表達(dá)量。
前面說的是商業(yè)化產(chǎn)品，構(gòu)建到單獨(dú)質(zhì)粒上能更好地滿足不同客戶的需求。但你個(gè)人也可以自己設(shè)計(jì)，將目的蛋白與分子伴侶插入同一質(zhì)粒，可以用兩個(gè)不同的啟動子，也可以都用T7啟動子，或者用一個(gè)T7啟動子構(gòu)建順反子表達(dá)也可以，看你實(shí)際需求。
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分子伴侶的表達(dá)質(zhì)粒，其復(fù)制子跟大部分大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒都不同。