求助關(guān)于Sephadex G-100純化的問題
求助各位大神,本人現(xiàn)在用Sephadex G-100純化糖蛋白,剛開始的時候,柱子平衡好之后第一次過柱子峰形正常,第二次跑的峰形就出現(xiàn)雜峰峰形,于是每次灌柱后只跑一次,F(xiàn)在灌好柱子后柱子下出口放低出水,一旦抬高放到收集器上就不怎么流,達不到接收測量的量,不知道問題出現(xiàn)在哪里,希望各位指點一下,感激不盡
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求助各位大神,本人現(xiàn)在用Sephadex G-100純化糖蛋白,剛開始的時候,柱子平衡好之后第一次過柱子峰形正常,第二次跑的峰形就出現(xiàn)雜峰峰形,于是每次灌柱后只跑一次,F(xiàn)在灌好柱子后柱子下出口放低出水,一旦抬高放到收集器上就不怎么流,達不到接收測量的量,不知道問題出現(xiàn)在哪里,希望各位指點一下,感激不盡
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
這個樹脂應該是可以重復用的,不用每次都灌柱,可以試著用NaOH溶液清洗一下。
關(guān)于柱子不流,你是靠重力讓流動相流動,還是通過泵施加了壓力?如果純粹靠重力的話,出口管路抬得太高當然就流不出來了,為啥不把接收器放在下面呢?
謝謝你的回復,很感謝,我加了個蠕動泵為了可以自動走流動相,難道不是通過泵調(diào)流速嗎?什么時候要考慮接收器的位置呢?接收器目前和其他儀器一樣放在試驗臺上
不太理解你用的體系是什么樣子。建議要么連用hplc,用hplc的高壓泵。要么就簡易的方法,填個開放式的小柱子豎著放,靠重力讓液體留下來。
hplc高壓蠕動泵壓力足夠高的話,總歸是能流的呀。除非你的柱子堵了,那就要用NaOH等清洗,保存柱子的時候用20%乙醇,防止里面長菌。
鏈接: https://pan.baidu.com/s/1URQcfk5WHERXQxxdcNbJ0Q 提取碼: mp4c 復制這段內(nèi)容后打開百度網(wǎng)盤手機App,操作更方便哦
裝置是這樣的,麻煩您幫我康康,謝謝您
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目測你用的這個蠕動泵是那種勁兒比較小的,壓力不太夠用。但是靠重力應該是可以流下來的,只要你把上液面和下面出口的垂直距離設置得足夠高,P=ρgh,壓強就是和兩個液面垂直距離成正比。你現(xiàn)在液體的入口和出口都擺在桌子上處于同一水平面,所以自然就沒壓力了。找個架子把進樣buffer的瓶子放在最上面,然后把接收器放地上。
這種樹脂就是流得比較慢,流速能到0.5ml/min就夠用了。
我只能說這個膠很軟,不好裝柱,反壓也挺大
同感哈哈