請(qǐng)教各位前輩，我目前要純化一種蛋白，無標(biāo)簽，約60KD，PI5.1

實(shí)驗(yàn)步驟如下：

樣品處理：

1.組織溶于等體積標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液（含100mM Kcl）樣品洗滌超聲離心棄上清取沉淀，重復(fù)3次

2.沉淀復(fù)懸于5倍體積提取液（含500mmNacl）超聲離心棄上清取沉淀，重復(fù)2次

3.沉淀復(fù)懸于Buffer A（10mM 磷酸二氫鈉），超聲后過濾膜得上柱樣品

柱子為DEAE FF 1ml

平衡和洗脫緩Buffer均為磷酸二氫鈉（含8M尿素），分別為10mM和1000mM,PH均為7.0

上柱前曾用BufferA(10mM)平衡20個(gè)柱體積至基線平穩(wěn)，上樣量為10ml

洗脫方式為梯度濃度洗脫，以2ml/min，10ml一管收集；梯度濃度設(shè)置如下

NO      時(shí)間       A%        B%
1           0         100         0
2          30         90         10
3          90         85         15
4         150        80         20  
5         240        60         40
6         300        50         50
7         360        30         70
8         390         0         100

因?qū)嶒?yàn)室沒有電導(dǎo)儀，所以沒有測過電導(dǎo)

出現(xiàn)的問題：
按梯度濃度收集80管樣品，總是在第一管出現(xiàn)目的蛋白和一些雜蛋白，后續(xù)管里無任何蛋白。嘗試過改變PH為6.5，7.5，8.0，結(jié)果依然如此。請(qǐng)教各位前輩這是沒掛上柱子嗎？在不換柱子得情況下有哪些可以改進(jìn)的地方？ 返回小木蟲查看更多