低溫誘導(dǎo)目的蛋白較少,高溫誘導(dǎo)目的蛋白在沉淀中
分子量為84.5kDa,載體為pET-28a,宿主為BL21,已經(jīng)嘗試過表達(dá)優(yōu)化,低溫誘導(dǎo)情況下提高iptg濃度以及延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間,但上清中的目的蛋白都較少,25度開始表達(dá)目的蛋白就在沉淀中,求大佬們支招下一步該怎么辦
返回小木蟲查看更多
今日熱帖
分子量為84.5kDa,載體為pET-28a,宿主為BL21,已經(jīng)嘗試過表達(dá)優(yōu)化,低溫誘導(dǎo)情況下提高iptg濃度以及延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間,但上清中的目的蛋白都較少,25度開始表達(dá)目的蛋白就在沉淀中,求大佬們支招下一步該怎么辦
返回小木蟲查看更多
京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
溫度再低一些,18°C@16小時(shí),如果不行,換ArcticExpress宿主菌,降到10°C,12°C
這樣的表達(dá)量不算低了
?)可以嘗試ArcticExpress溫度可以低至6-8°C,
(2)或可以嘗試含GroEL的輔助表達(dá)菌種參與表達(dá)
(3)如果蛋白細(xì)胞毒性大,可以考慮分泌到細(xì)胞周質(zhì)或培養(yǎng)基中
(4)或加入MBP,GST或其他助溶標(biāo)簽
(5)用體外TnT表達(dá)后純化,成本會(huì)高一些,
不知道你有沒有考慮過目的蛋白不是分泌蛋白的問題,絕大部分蛋白在沉淀中可能是與細(xì)胞膜結(jié)合導(dǎo)致的,可以往這一方面考慮一下。