鎳柱親和層析，純化結(jié)果總是有三四十kDa的雜蛋白
請(qǐng)教一下，用大腸桿菌表達(dá)目的蛋白，超聲破碎后，使用鎳柱親和層析時(shí)，填料是Ni-IMAC，結(jié)合緩沖液是20mmol/L的Tris-HCl，500mmol/L NaCl，pH7.5。
SDS-PAGE蛋白膠圖上，總是有三四十kDa的雜蛋白，應(yīng)該怎樣提高純化效果呢？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
吧這個(gè)蛋白打個(gè)質(zhì)譜，分析下是什么蛋白。
等度洗脫還是線性洗脫？
如果不表達(dá)質(zhì)粒，平行做實(shí)驗(yàn)，能看到這條帶嗎？
1：如果是目的蛋白分子量大于該條帶，則可能是目的條帶降解產(chǎn)物，
2：如果是該蛋白比目的蛋白大，可能是目的蛋白聚合物
3：可能是大腸桿菌自身的蛋白（有些文獻(xiàn)會(huì)報(bào)道）
1,2比較難除去，分子量差別大考慮分子篩
3的話，過(guò)離子交換柱或其他柱子可能有效，
可能性之一是質(zhì)粒帶的抗性蛋白。表達(dá)量高，如果剛好有幾個(gè)his，也容易掛在鎳柱上。梯度洗脫可以提高純度