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darlingbear

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不是組蛋白，是LC3

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11樓2016-05-19 20:20:01

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煙鍋八路

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我們實(shí)驗(yàn)室用的70v恒壓，110分鐘濕轉(zhuǎn)，用的是PVDF膜

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12樓2016-05-20 09:19:47

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12樓: Originally posted by 煙鍋八路 at 2016-05-20 09:19:47
我們實(shí)驗(yàn)室用的70v恒壓，110分鐘濕轉(zhuǎn)，用的是PVDF膜

而且也是有轉(zhuǎn)LC3。每次都很好。

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13樓2016-05-20 09:20:23

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shenhaiwang

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【答案】應(yīng)助回帖

轉(zhuǎn)膜是濕法還是半干法？濕法110min應(yīng)該可以的。最好將未轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE進(jìn)行染色，看看目的條帶是否也是比較淺，才好判斷是否是轉(zhuǎn)膜的問(wèn)題

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14樓2016-05-20 17:01:27

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kaili-007

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14kd一般不超過(guò)半小時(shí)吧

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人生是一場(chǎng)修行

15樓2016-05-20 23:15:43

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引用回帖:

14樓: Originally posted by shenhaiwang at 2016-05-20 17:01:27
轉(zhuǎn)膜是濕法還是半干法？濕法110min應(yīng)該可以的。最好將未轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE進(jìn)行染色，看看目的條帶是否也是比較淺，才好判斷是否是轉(zhuǎn)膜的問(wèn)題

我用的是濕法，但如果是轉(zhuǎn)過(guò)了的話，應(yīng)該是從膠轉(zhuǎn)到了膜，又從膜里轉(zhuǎn)走了吧

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16樓2016-05-21 08:41:14

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market正常說(shuō)明轉(zhuǎn)膜沒(méi)問(wèn)題吧。

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懂

17樓2016-05-21 09:02:47

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shenhaiwang

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引用回帖:

16樓: Originally posted by darlingbear at 2016-05-21 08:41:14
我用的是濕法，但如果是轉(zhuǎn)過(guò)了的話，應(yīng)該是從膠轉(zhuǎn)到了膜，又從膜里轉(zhuǎn)走了吧
...

理論上是這種可能，現(xiàn)實(shí)操作中和膜的孔徑和蛋白的性質(zhì)也有關(guān)系。先確定你的蛋白量有沒(méi)有問(wèn)題，如果沒(méi)有問(wèn)題的話，再做一次吧

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18樓2016-05-21 10:48:45

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snowcyshelly

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【答案】應(yīng)助回帖

我做12kd的，濕法NC膜，200mA 1h，重復(fù)過(guò)很多次沒(méi)有出過(guò)任何問(wèn)題。我認(rèn)為你可能確實(shí)轉(zhuǎn)膜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，你10kdmarker還看得到嗎？建議保證10kd和15kd的marker都沒(méi)問(wèn)題，那你目的蛋白條帶肯定也就沒(méi)問(wèn)題了……如果還有問(wèn)題，那就不是轉(zhuǎn)膜時(shí)間的錯(cuò)。

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19樓2016-05-21 10:53:29

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蟲(chóng)蟲(chóng)笑了

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感覺(jué)轉(zhuǎn)膜時(shí)間有點(diǎn)長(zhǎng)了，這個(gè)要好好做幾次試試看

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1111

20樓2016-05-22 16:45:42

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