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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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wnjtmp505

祝福

11樓2016-07-17 18:42:35

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5樓: Originally posted by 不會(huì)悲傷的魚(yú) at 2016-07-16 10:32:41
質(zhì)粒怎么都能提出來(lái)的吧，只是是不是你的目的質(zhì)粒而已，但是每個(gè)人操作方法也不同，我覺(jué)得你可以一步一步排除原因，首先是你的菌液，先鑒定一下，pcr什么的，確保菌是正確的，然后是搖菌，我們一般認(rèn)為大腸的生長(zhǎng)期 ...

謝謝解答，菌液在接種前跑過(guò)pcr，是正確的，然后接到培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜后，提不出質(zhì)粒，od值大概2.2左右，最主要是過(guò)夜搖過(guò)的菌液有股酸味，很臭，不知道這個(gè)是怎么回事，會(huì)不會(huì)影響，試劑盒也是正確的

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加油加油�。�！

12樓2016-07-18 09:19:23

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4樓: Originally posted by 曼陀羅的祈禱 at 2016-07-16 10:19:05
我一般都是50ml離心管加15ml培養(yǎng)基，菌液先活化2小時(shí)再接種1:100的比例接，然后培養(yǎng)14個(gè)小時(shí)吧，第二天用試劑盒提質(zhì)粒，一般都能提出來(lái)，你的提不出來(lái)是不是傳代次數(shù)太多，時(shí)間久了質(zhì)粒丟失，之前有沒(méi)有保存好的質(zhì)粒 ...

謝謝解答，菌液在接種前跑過(guò)pcr，是正確的，然后接到培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜后，提不出質(zhì)粒，od值大概2.2左右，最主要是過(guò)夜搖過(guò)的菌液有股酸味，很臭，不知道這個(gè)是怎么回事，會(huì)不會(huì)影響，試劑盒也是正確的，時(shí)間久了？難道搖8小時(shí)就可以？

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加油加油�。。�

13樓2016-07-18 09:20:53

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2樓: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-07-15 21:38:30
你加抗生素了嗎？可能是雜菌污染

抗生素加了的

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加油加油！��！

14樓2016-07-18 09:21:06

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曼陀羅的祈禱

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【答案】應(yīng)助回帖

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13樓: Originally posted by 愛(ài)如風(fēng)過(guò)3610 at 2016-07-18 09:20:53
謝謝解答，菌液在接種前跑過(guò)pcr，是正確的，然后接到培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜后，提不出質(zhì)粒，od值大概2.2左右，最主要是過(guò)夜搖過(guò)的菌液有股酸味，很臭，不知道這個(gè)是怎么回事，會(huì)不會(huì)影響，試劑盒也是正確的，時(shí)間久了？難 ...

會(huì)不會(huì)是雜菌污染

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想做個(gè)有趣的人，卻在逗比的道路上越走越遠(yuǎn)~

15樓2016-07-18 09:33:59

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不會(huì)悲傷的魚(yú)

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12樓: Originally posted by 愛(ài)如風(fēng)過(guò)3610 at 2016-07-18 09:19:23
謝謝解答，菌液在接種前跑過(guò)pcr，是正確的，然后接到培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜后，提不出質(zhì)粒，od值大概2.2左右，最主要是過(guò)夜搖過(guò)的菌液有股酸味，很臭，不知道這個(gè)是怎么回事，會(huì)不會(huì)影響，試劑盒也是正確的

...

你們實(shí)驗(yàn)室都是這樣還是是你一個(gè)人的提不出來(lái)？會(huì)不會(huì)是因?yàn)榄h(huán)境或者水源污染了其它細(xì)菌或真菌或者噬菌體什么的？

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16樓2016-07-18 09:39:06

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不愛(ài)做實(shí)驗(yàn)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

這是以前在網(wǎng)上找到的一些關(guān)于提質(zhì)粒的分析，就轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)你參考吧，順便感謝整理這些的陌生人：
1、大腸桿菌老化：涂布平板培養(yǎng)后，重新挑選新菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)。
2、質(zhì)粒拷貝數(shù)低：使用低拷貝數(shù)載體引起的質(zhì)粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體。
3、菌體中無(wú)質(zhì)粒：有些質(zhì)粒本身不能在某些菌種中穩(wěn)定存在，經(jīng)多次轉(zhuǎn)接后有可能造成質(zhì)粒丟失。
4、堿裂解不充分：
   使用過(guò)多菌體培養(yǎng)液，導(dǎo)致菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加溶液P1.P2.P3用量。
   對(duì)低拷貝數(shù)質(zhì)粒，提取時(shí)，可加倍使用溶液P1.P2.P3，可能有助于增加質(zhì)粒提取量和質(zhì)量。
5、溶液使用不當(dāng)：
   溶液P2.P3在溫度較低時(shí)可能出現(xiàn)渾濁，應(yīng)置于37℃保溫片刻直至溶解為清亮的溶液，才能使用。
6、吸附柱過(guò)載：
   不同產(chǎn)品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的質(zhì)粒量很大，請(qǐng)分多次提取。
   若用富集培養(yǎng)基，例如TB 或2×YT，菌液體積必須減少；
   若質(zhì)�；蛩拗骶欠浅８叩目截悢�(shù)或生長(zhǎng)率，則需調(diào)整LB培養(yǎng)液體積。
7、質(zhì)粒未全部溶解（尤其質(zhì)粒較大時(shí)）：洗脫溶解質(zhì)粒時(shí)，可適當(dāng)加溫或延長(zhǎng)溶解時(shí)間。
8、乙醇?xì)埩簦?漂洗液洗滌后應(yīng)離心盡量去除殘留液體。樹(shù)脂型試劑盒漂洗后應(yīng)晾干樹(shù)脂，再加入洗脫緩沖液。
9、洗脫液加入位置不正確：
   洗脫液應(yīng)加在硅膠膜中心部位以確保洗脫液會(huì)完全覆蓋硅膠膜的表面達(dá)到最大洗脫效率。
10、洗脫液不合適：
   DNA只在低鹽溶液中才能被洗脫，如洗脫緩沖液EB (10 mM Tris•Cl, pH 8.5) 或水。
   洗脫效率取決于pH值。最大洗脫效率在pH7.0-8.5間。
   當(dāng)用水洗脫時(shí)確保其pH值在此范圍內(nèi)，如果pH過(guò)低可能導(dǎo)致洗脫量低。
   洗脫時(shí)將滅菌蒸餾水或洗脫緩沖液加熱至60℃后使用有利于提高洗脫效率。
11、洗脫體積太小
   洗脫體積對(duì)回收率有一定影響。隨著洗脫體積的增大回收率增高，但產(chǎn)品濃度降低。
   為了得到較高的回收率可以適當(dāng)增大洗脫體積。
12、洗脫時(shí)間過(guò)短
   洗脫時(shí)間對(duì)回收率也會(huì)有一定影響。洗脫時(shí)放置一分鐘可達(dá)到較好的效果。

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17樓2016-07-18 10:21:22

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梅太奇阿拉干

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可能搖菌有一點(diǎn)問(wèn)題，正常新鮮的大腸桿菌是有一些惺臭味，但不是惡臭，菌體是渾濁但是清亮的，不是粘稠有絮壯的，你試試搖三個(gè)小時(shí)，取一些菌液測(cè)一下od，每隔一段時(shí)間測(cè)一下，直到0.6到0.8為止。然后再?lài)?yán)格按照試劑盒要求做，不要著急，多做幾次就好了。祝成功

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18樓2016-07-18 14:24:19

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

7樓: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:31:25
提質(zhì)粒的話(huà)我們都是搖將近12個(gè)小時(shí)的，這應(yīng)該不是提不出來(lái)的原因~如果培養(yǎng)時(shí)加抗生素了，保證長(zhǎng)出來(lái)的菌是轉(zhuǎn)化子，提不出來(lái)可能是由于質(zhì)粒的拷貝數(shù)太低~之前我們做谷棒就是這樣，一直提不出來(lái)，后來(lái)才知道是拷貝數(shù)只 ...

你好，我用的質(zhì)粒也是拷貝數(shù)比較低，這種情況怎么辦呢？

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19樓2016-08-01 17:12:49

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

19樓: Originally posted by Joyce春春 at 2016-08-01 17:12:49
你好，我用的質(zhì)粒也是拷貝數(shù)比較低，這種情況怎么辦呢？...

驗(yàn)證的時(shí)候直接pcr鑒定

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20樓2016-08-01 18:26:24

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