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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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yuanbo934

至尊木蟲 (著名寫手)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖交流
擴不出來可能是,有機溶劑沒有洗干凈,可以將模板稀釋5倍10倍100倍進行擴增
11樓2010-11-24 18:23:00
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夜舞龍

至尊木蟲 (知名作家)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖交流
CTAB室溫放很久都能用,我用過放一年多的。
100mg是用1.5ml管子提的嗎?多少提取緩沖液?如果是多糖多酚的植物,我覺得是樣品用的太多。這樣的植物一定要敢于減少用的樣品量,才會提出質(zhì)量和濃度都很好的DNA,我做過的松樹和幾種灌木都證實這一點。

[ Last edited by 夜舞龍 on 2010-11-24 at 21:15 ]
12樓2010-11-24 21:10:20
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tracy198410

金蟲 (小有名氣)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖交流
沒用飽和酚抽提的話蛋白質(zhì)雜質(zhì)應(yīng)該多一些吧,一般需要抽提2-3次
走過彎路不可怕,失敗了也不可怕,可怕的是忘卻了最初的夢想,放棄了最初的堅定
13樓2010-11-25 12:19:52
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clare420

新蟲 (小有名氣)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖交流
不是多糖污染,多糖污染是鋸齒狀的,多酚污染可以看出來啊,有的有顏色的,可以試試PVP,或提取時用高鹽溶液,還有就是有RNA 污染的原因很多,可能和材料,用量,酸堿度有關(guān),你用的什么平衡的酚?
14樓2010-11-25 16:34:39
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qidannvzi

銀蟲 (正式寫手)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖
西瓜: gDNA就是基因組DNA的意思。maker可以問問你們當?shù)氐拇砩膛?2011-12-08 19:00:09
引用回帖:
5樓: Originally posted by holyala at 2010-11-19 14:00:35:
你Marker用的DL2000?提gDNA用λ Hind III marker啦。
下面那一大團亮的就是RNA咯,要么用RNA酶消化一下,要么找個kit,過柱純化一下。
看起來DNA提的還不錯,PCR不行應(yīng)該不是模板的問題。

我想問,那個gDNA是什么意思,是基因組DNA的意思么?λ Hind III marker這個又是什么呢?我找不到合適的檢測DNA的marker。
準備跨新年!
15樓2011-12-07 16:51:28
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peng~yu

銀蟲 (小有名氣)

★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖
西瓜(金幣+1): 用量是多少捏?嘿嘿 2011-12-08 19:00:28
下面的亮帶肯定是RNA  不會是別的東西了~方法就是再用RNAase消化一段時間~我提基因組的話一般都是RNAase消化30-40分鐘的呢~
16樓2011-12-07 23:49:31
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elbo

金蟲 (小有名氣)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖
我感覺你提的DNA量不多,我一般提的時候都不加RNA 酶,幾乎沒有RNA,說明提取過程還是有點問題。
17樓2011-12-08 15:06:55
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wskxbxf

新蟲 (小有名氣)

★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖
西瓜(金幣+2): Good! 2011-12-08 19:00:47
下面的亮帶就是RNA 我一般都是在用酚仿抽提之后,加RNase處理一小時,然后再用氯仿異戊醇抽提一次 這樣提取的DNA里就沒有RNA了,至于pcr 跟你的程序和引物都有很大關(guān)系的 λ Hind III 也是一種marker 一般基因組DNA我們用這個marker來比較 這種marker里有23kb的條帶 和基因組差不多了 我們買的是天根的 你查查就能查出來了
18樓2011-12-08 15:32:22
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wcg129

禁蟲 (著名寫手)

★ ★
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西瓜(金幣+1): Good! 2011-12-08 19:00:57
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19樓2011-12-08 16:03:43
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peng~yu

銀蟲 (小有名氣)


小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖
RNAase的話我的用量一般是3ul,太多的話是會降解DNA的。。
20樓2011-12-09 20:35:17
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