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fw8505

金蟲 (正式寫手)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
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8樓: Originally posted by 癡夢(mèng)瀟湘 at 2012-12-17 11:52:07
第一個(gè)主要是抗高血壓的,但抗高血壓藥都比較便宜,如果要研發(fā),估計(jì)效果比現(xiàn)有利尿藥好很多才行,第二個(gè)主要市場(chǎng)應(yīng)該在不發(fā)達(dá)的地區(qū)吧,我國和歐美市場(chǎng)很小,目前確實(shí)有不少研究機(jī)構(gòu)在做抗瘧藥,也發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)新靶 ...

高血壓藥物太多了,機(jī)理也太多了,想要脫穎而出難度還是有的。
對(duì)于瘧疾藥,除去我國和歐美,雖然地理面積也很大,但是似乎賣不到多少錢吧。不過如果找到更有效的藥,做個(gè)應(yīng)急儲(chǔ)備或者人道援助還是有意義的
11樓2012-12-18 08:45:09
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huagong071

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
值得學(xué)習(xí),謝謝樓主分享!

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12樓2012-12-18 08:56:18
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pkuchemistry

捐助貴賓 (著名寫手)

引用回帖:
9樓: Originally posted by xiananxue at 2012-12-17 19:32:44
那個(gè)較新靶點(diǎn)呢...

保密
書中自有黃金屋,書中自有顏如玉。
13樓2012-12-18 23:55:52
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癡夢(mèng)瀟湘

木蟲 (著名寫手)


癡夢(mèng)瀟湘: 回帖置頂 2013-01-04 19:49:39
ApoE4這個(gè)靶點(diǎn)的第一個(gè)小分子調(diào)節(jié)劑前幾年就已經(jīng)申請(qǐng)專利了,只是直到最近才公開發(fā)表。這個(gè)課題組做ApoE研究已有20年歷史,連續(xù)在JBC、PNAS上刊登相關(guān)論文,Merck好像對(duì)這個(gè)課題組很有興趣。JMC上沒有原始研究,只有一篇綜述,不過這個(gè)靶點(diǎn)火起來的可能性非常大,畢竟β-分泌酶、γ-分泌酶臨床研究連續(xù)受挫的情況下,作用明確的新靶點(diǎn)非常值得一試。通過圖4可以看到,ApoE4對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)有非常明顯的作用。

ApoE的結(jié)構(gòu)特征
ApoE是一種膽固醇誘導(dǎo)的載脂蛋白(Apoprotein),作為脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白存在于血液和組織液中,能夠重分配膽固醇和磷脂供細(xì)胞代謝或修復(fù)生物膜。ApoE是由299個(gè)氨基酸構(gòu)成的蛋白(34kDa),有三種亞型(ApoE2、ApoE3、ApoE4)。三種亞型互相組合形成六種表型(三個(gè)雜合子、三個(gè)純合子):ApoE2/2、ApoE3/3、ApoE4/4、ApoE2/3、ApoE2/4、ApoE3/4。三種亞型的不同之處在于112位和158位殘基,ApoE2為Cys112/Cys158,ApoE3為Cys112/Arg158,ApoE4為Arg112/Arg158。
ApoE主要由肝細(xì)胞合成,進(jìn)入血液形成脂蛋白顆粒(極低密度脂蛋白、乳糜微粒、高密度脂蛋白),在血漿中的濃度為40-70 μg/mL。第二個(gè)合成部位是大腦,主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)合成,受損的神經(jīng)元也會(huì)合成少量ApoE。神經(jīng)元損傷誘導(dǎo)ApoE的合成,以便轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇和其他脂質(zhì),用于膜修復(fù)。另外全身的巨噬細(xì)胞(macrophage)、大腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia),也能合成ApoE。腦脊液(cerebrospinal fluid)中,ApoE是主要的脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,與HDL樣顆粒和小磷脂顆粒(small phospholipid disk)有關(guān)。
ApoE是LDL受體相關(guān)蛋白的主要配體,含有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域,N端與LDL受體結(jié)合,C端與脂質(zhì)結(jié)合,中間由鉸鏈連接。LDL受體結(jié)合區(qū)是N端的134-150位氨基酸殘基,這一區(qū)域富含精氨酸和賴氨酸(堿性)。ApoE3、ApoE4都能與受體結(jié)合,而ApoE2與受體結(jié)合不好,與III型高脂蛋白血癥有關(guān)。脂質(zhì)結(jié)合區(qū)是C端的244-272位氨基酸殘基(推測(cè)形成α-螺旋),ApoE2、ApoE2傾向于小的富含磷脂的HDL,ApoE4傾向于大的甘油三酯。
X-ray晶體結(jié)構(gòu)揭示了ApoE3與ApoE4關(guān)鍵氨基酸殘基的不同取向(J. Biol. Chem. 1994 , 269, 22358-22365),ApoE4的Arg61能夠與Glu255相互作用,而ApoE3不能。ApoE4的Arg61或Glu255變異,可以將其轉(zhuǎn)變?yōu)锳poE3樣構(gòu)象,消除ApoE4的有害作用。ApoE2、ApoE3沒有這種結(jié)構(gòu)域之間的相互作用(domain interaction),呈現(xiàn)一種比較開闊的結(jié)構(gòu)。另外,在生理狀態(tài)下,三種亞型的穩(wěn)定性也有差異(ApoE2>ApoE3>ApoE4)。ApoE4的結(jié)構(gòu)域相互作用和不穩(wěn)定性,與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān),阻斷結(jié)構(gòu)域相互作用,可以消除其有害作用。

ApoE4與Alzheimer’s disease的關(guān)系
ApoE4通過兩方面影響Alzheimer’s disease:(1)增加患病風(fēng)險(xiǎn);(2)提前患病年齡,含單個(gè)ApoE4等位基因,患病提前7-8年,含一對(duì)ApoE4等位基因,患病提前15-16年。65%-80%的AD病人至少含有一個(gè)ApoE4等位基因,相反普通人群只有25%是ApoE4攜帶者。有文獻(xiàn)報(bào)道,ApoE4的表達(dá)會(huì)阻礙淀粉樣蛋白(Aβ)的清除(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2011, 108, 4236-4241),增加Aβ的合成(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2005, 102, 18700-18705)。
正常情況下,細(xì)胞合成ApoE后經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn),分泌到細(xì)胞外。由于ApoE4的結(jié)構(gòu)域相互作用,形成異常構(gòu)象,可能被蛋白酶誤解切割,產(chǎn)生有神經(jīng)毒性的碎片,脫離轉(zhuǎn)運(yùn)通路,進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中。這些碎片的有害作用包括:(1)損害神經(jīng)元線粒體功能:改變線粒體膜電位,降低線粒體電子傳遞酶活性(如線粒體細(xì)胞色素C氧化酶(mtCOX1)和ATP合成酶活性35-40%);(2)降低神經(jīng)元線粒體運(yùn)動(dòng)能力(neuronal mitochondrial motility);(3)阻礙突觸生成(synaptogenesis),降低突觸連接(synaptic spine)的密度;(4)損害細(xì)胞骨架:摧毀微管、Tau蛋白磷酸化、神經(jīng)纖維纏結(jié);(5)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾。汉qRGABA能中間神經(jīng)元缺失;損害學(xué)習(xí)和記憶功能。


ApoE4結(jié)構(gòu)校正劑(ApoE4 structure correctors, ApoE4SC)
Yadong Huang等人篩選了ChemBridge library,發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物CB9032258,與ApoE4結(jié)合后,能阻斷ApoE4的結(jié)構(gòu)域相互作用,增加mtCOX1水平。隨后與Merck Research Laboratories合作,發(fā)現(xiàn)一系列ApoE4SC(PH-001、PH-002活性較好)。
圖1. ApoE4結(jié)構(gòu)校正劑



圖2. 熒光共振能量轉(zhuǎn)移分析(FRET assay):綠色熒光蛋白(GFP)作為熒光供體,融合在ApoE的N端,大腸桿菌二氫葉酸還原酶(eDHFR)融合在AopE的C端,形成GFP-ApoE-DHFR,將它表達(dá)在Neuro-2a細(xì)胞上。加入eDHFR高親和力的配體甲氧芐胺嘧啶(TMP),并且與六氯-6-甲基熒光素(HEX)共軛,對(duì)位熒光受體。當(dāng)GFP與TMP-HEX的距離在7-10 nm時(shí),GFP會(huì)激發(fā)TMP-HEX發(fā)出565nm熒光。GFP-ApoE4-eDHFR的熒光強(qiáng)度要高,因?yàn)橛薪Y(jié)構(gòu)域相互作用,使得N端和C端互相靠近。當(dāng)給予化合物CB9032258時(shí),GFP-ApoE4-eDHFR的熒光強(qiáng)度顯著下降,而GFP-ApoE3-eDHFR基本不變。


圖3. mtCOX1水平分析:表達(dá)ApoE3與ApoE4-R61T(61位氨基酸殘基變異,不能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)域相互作用)的Neuro-2a細(xì)胞中mtCOX1水平與對(duì)照細(xì)胞相似,而表達(dá)ApoE4的Neuro-2a細(xì)胞中mtCOX1水平顯著下降。當(dāng)給予化合物CB9032258后,表達(dá)ApoE4的細(xì)胞中mtCOX1水平顯著增加,而表達(dá)ApoE3和ApoE4-R61T的細(xì)胞維持不變。


圖4. ApoE4對(duì)神經(jīng)元生長(zhǎng)的影響:表達(dá)ApoE4的Neuro-2a細(xì)胞基本沒有長(zhǎng)突觸,而表達(dá)ApoE3和ApoE4-R61T的細(xì)胞都能長(zhǎng)出長(zhǎng)突觸。當(dāng)給予化合物PH-002后,表達(dá)ApoE4的細(xì)胞也能長(zhǎng)出長(zhǎng)突觸。


[ Last edited by 癡夢(mèng)瀟湘 on 2013-1-4 at 19:51 ]
14樓2013-01-04 19:49:18
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sangdy8

至尊木蟲 (著名寫手)

不再低調(diào)

回頭拜讀
我為人人,人人為我
15樓2013-08-12 16:50:58
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coldok

金蟲 (正式寫手)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
LZ涉獵的領(lǐng)域如此廣泛,而且每個(gè)領(lǐng)域都不是蜻蜓點(diǎn)水,都有自己的獨(dú)到解讀,實(shí)在是衷心佩服!
各美其美美人之美美美與共天下大同
16樓2013-08-20 13:23:56
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