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roomofxw

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10樓: Originally posted by 凌波麗 at 2013-05-08 11:20:56
包涵體的理解上可能各有差異，不過(guò)包涵體一般是是指原核表達(dá)系統(tǒng)過(guò)量和非正確折疊表達(dá)后形成的固體顆粒，此時(shí)包涵體狀態(tài)的酶多數(shù)在固體的內(nèi)層無(wú)法接觸底物和水溶液，剛談不上底物通道。即使在固體表面的酶也因?yàn)槠錁?gòu) ...

Inclusion bodies:a new concept
microbial cell factories,2010,9:80

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11樓2013-05-08 13:08:18

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凌波麗

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Inclusion bodies:a new concept ???microbial cell factories,2010,9:80有多少看過(guò)？

我告訴你：Inclusion bodies用于病毒是指病毒感染的特定區(qū)域�。�

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12樓2013-05-08 13:18:27

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http://labs.fhcrc.org/strong/StrongLabRefoldingProtocol.pdf 這篇文獻(xiàn)引用的Inclusion bodies就是我說(shuō)的概念。

樓上說(shuō)的是 http://www.microbialcellfactorie ... /1475-2859-9-80.pdf
這個(gè)概念我不認(rèn)為已經(jīng)被廣泛接受。

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13樓2013-05-08 13:23:10

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粉碎細(xì)胞時(shí)的沉淀當(dāng)然可能是有活性的，但是形成固體顆粒狀的包涵體肯定沒(méi)有生物活性。我說(shuō)的是固體顆粒的蛋白質(zhì)異常折疊盒凝聚物是沒(méi)有生物活性。至于一個(gè)概念的提出是否會(huì)被廣泛接受與其被提出的時(shí)間沒(méi)有直接關(guān)聯(lián)，首先是其內(nèi)涵是否明確和界限分明即有實(shí)用性，我不排除Inclusion bodies用于蛋白質(zhì)折疊領(lǐng)域會(huì)更新，但是僅僅憑一篇文獻(xiàn)就認(rèn)為某概念被廣泛接受是不適當(dāng)?shù)�，一般而言，一個(gè)成熟的被廣泛接受的概念應(yīng)該出現(xiàn)在國(guó)際流行的大學(xué)本科和研究生的專業(yè)教材中，或者在SCI文獻(xiàn)中廣泛地被使用。

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14樓2013-05-08 13:33:26

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9樓: Originally posted by roomofxw at 2013-05-08 10:52:48
菌體濃度不應(yīng)該高了，不利于破碎。另外超聲探頭的磨損情況之類，多聽(tīng)聽(tīng)聲音，不應(yīng)該是沉悶的聲音，很尖利才是。
不過(guò)也不能否定去測(cè)包涵體有活性，只不過(guò)這種情況很少，是酶的話就可能性小了...

你們破碎時(shí)，是用什么溶菌的，我是用磷酸緩沖液溶收集的菌體，然后直接破碎的，是不是應(yīng)該有專門的破菌緩沖液。

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nothing isimpossible

15樓2013-05-08 13:47:42

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14樓: Originally posted by 凌波麗 at 2013-05-08 13:33:26
粉碎細(xì)胞時(shí)的沉淀當(dāng)然可能是有活性的，但是形成固體顆粒狀的包涵體肯定沒(méi)有生物活性。我說(shuō)的是固體顆粒的蛋白質(zhì)異常折疊盒凝聚物是沒(méi)有生物活性。至于一個(gè)概念的提出是否會(huì)被廣泛接受與其被提出的時(shí)間沒(méi)有直接關(guān)聯(lián)， ...

定義的范圍不一樣罷了
你指的是嚴(yán)格意義的包涵體
我指的只是破碎細(xì)胞的沉淀蛋白
當(dāng)然這種現(xiàn)象不只一兩篇文獻(xiàn)
例如，淀粉樣蛋白正確情況就會(huì)產(chǎn)生聚集開(kāi)始沉淀，而標(biāo)記抗體的藻膽蛋白形成沉淀也依然發(fā)熒光，趨化因子系列蛋白我也正在探索。
它們可能不涉及二硫鍵錯(cuò)配，結(jié)構(gòu)大量折疊錯(cuò)誤，僅僅是蛋白結(jié)構(gòu)的特性導(dǎo)致松散的聚集在一起，通過(guò)緩沖液的改變，或者就是測(cè)活緩沖液環(huán)境的不同，就解離復(fù)溶了。

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16樓2013-05-09 09:10:19

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你與怎么理解包涵體是你的事情，但是蛋白質(zhì)形成固體顆粒是肯定沒(méi)有生物活性的！！但是僅僅一篇名無(wú)名的文獻(xiàn)沒(méi)有價(jià)值！固定化酶是有生物活性的！

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17樓2013-05-09 11:11:14

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蛋白質(zhì)的晶體一般是有生物活性的，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的晶體含有相當(dāng)質(zhì)量比例的水，完全失去水蛋白質(zhì)晶體一般會(huì)變?yōu)榉勰�，但是沒(méi)有說(shuō)這是包涵體。如果非要說(shuō)包涵體不是那種原核基因表達(dá)產(chǎn)生的異常蛋白質(zhì)折疊引起的固體的沒(méi)有生物活性的顆粒，那木這種原有概念又該用什么概念加以代替那！�。�？?jī)H僅憑借一篇無(wú)名的文獻(xiàn)就說(shuō)包涵體有活性，那沒(méi)有活性的異常蛋白質(zhì)折疊引起的固體的沒(méi)有生物活性的顆粒又怎么算�。。�？這算是概念嚴(yán)謹(jǐn)嗎！��？？難道CNS沒(méi)有大量支持“包涵體是那種原核基因表達(dá)產(chǎn)生的異常蛋白質(zhì)折疊引起的固體的沒(méi)有生物活性的顆�！钡母拍顔�？？？誰(shuí)能證明那種原核基因表達(dá)產(chǎn)生的異常蛋白質(zhì)折疊引起的固體在水相中是有生物活性的？？？相反的證據(jù)倒是有不少！
一個(gè)科學(xué)的概念提出的時(shí)間與其存在的價(jià)值有必然聯(lián)系嗎？？現(xiàn)在又有誰(shuí)能推翻達(dá)爾文進(jìn)化論和愛(ài)因斯坦相對(duì)論？？有很多人試圖這樣做過(guò)。當(dāng)然任何理論都有其使用范圍，但是正確與錯(cuò)誤不可能是因?yàn)闀r(shí)間變?yōu)橐恢隆?

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18樓2013-05-09 11:31:55

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在變性包涵體使其溶解或把沉淀的生物大分子復(fù)合體溶解過(guò)程中切斷二硫鍵也是必要的，要使用DTT或巰基乙醇。但是如果有(His)6標(biāo)簽要過(guò)Ni2+-NTA樹(shù)脂親和層析柱，必須要在過(guò)柱前用超濾和透析把DTT去掉DTT大于1mmol/L會(huì)還原Ni2+離子導(dǎo)致掛柱失敗，巰基乙醇留下可以減少由于二硫鍵形成的交聯(lián)蛋白質(zhì)引起的污染。

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19樓2013-05-09 11:42:29

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引用回帖:

18樓: Originally posted by 凌波麗 at 2013-05-09 11:31:55
蛋白質(zhì)的晶體一般是有生物活性的，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的晶體含有相當(dāng)質(zhì)量比例的水，完全失去水蛋白質(zhì)晶體一般會(huì)變?yōu)榉勰�，但是沒(méi)有說(shuō)這是包涵體。如果非要說(shuō)包涵體不是那種原核基因表達(dá)產(chǎn)生的異常蛋白質(zhì)折疊引起的固體的沒(méi)有 ...

那些既沉淀，還能表現(xiàn)活性的蛋白，叫什么呢？既然覺(jué)得文獻(xiàn)不可信，沒(méi)關(guān)系啊，我做點(diǎn)實(shí)驗(yàn)重復(fù)重復(fù)文獻(xiàn)中提到的幾種重組蛋白，再來(lái)匯報(bào)就是了。
肯定不止一篇文獻(xiàn)啊，中英文相關(guān)報(bào)道都有的，我從引用中反查最早的一篇1989年報(bào)道酶的，當(dāng)然我下不到全文，有興趣查閱一下
The formation of biologically active beta-galactosidase inclusion bodies in Escherichia coli.
Culture conditions affecting the formation of beta-galactosidase inclusion bodies in E. coli were examined. High temperature, early induction, high salt concentration and low aeration were all found to favour an increase of insoluble beta-galactosidase and the formation of visible inclusion bodies. The ratio of soluble to insoluble beta-galactosidase decreased during the course of cell growth. When assayed for beta-galactosidase activity, the inclusion bodies were enzymatically active with a specific activity of one third that of soluble beta-galactosidase. The activity remained associated with the inclusion bodies on washing with detergent and high ionic strength buffers. These results suggest that inclusion bodies can contain correctly folded protein.

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20樓2013-05-10 09:21:18

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