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charlie9

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【答案】應(yīng)助回帖

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9樓: Originally posted by 飄零的葉子 at 2013-08-29 18:27:11
額，一抗是剛剛換過新的，是AB CAM的...

是不時(shí)這個(gè)抗體壓根兒就不識(shí)別這種變性的蛋白，與抗體新舊沒關(guān)系。樓主抗體肯定是用于Western的嗎？肯定是用于檢測(cè)變性的蛋白，而不是非變性得蛋白嗎？

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11樓2013-08-30 08:25:04

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11樓: Originally posted by charlie9 at 2013-08-30 08:25:04
是不時(shí)這個(gè)抗體壓根兒就不識(shí)別這種變性的蛋白，與抗體新舊沒關(guān)系。樓主抗體肯定是用于Western的嗎？肯定是用于檢測(cè)變性的蛋白，而不是非變性得蛋白嗎？...

抗體說明書上明確寫了可以用于做wb，效價(jià)也是明確的呀

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12樓2013-08-30 08:45:42

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10樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 00:25:10
細(xì)菌在蛋白loading buffer里也會(huì)部分破碎，煮過后會(huì)完全破碎。所以所謂沒有破碎的菌應(yīng)該也算是全菌蛋白了。至于為什么抗體不識(shí)別，可能是所用抗體的特異性問題，或者是western本身沒有做好。如果你能在考染的膠上看 ...

額，好吧，現(xiàn)在看來應(yīng)該是western沒有做好了

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13樓2013-08-30 08:46:52

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您有比較好的做western的方法嗎？參考一下

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14樓2013-08-30 08:47:20

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小鞋匠126_

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

很有可能是這個(gè)蛋白不是你的，而是本體表達(dá)的

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15樓2013-08-30 10:00:58

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【答案】應(yīng)助回帖

建議你用純化的蛋白做一下western，這樣就可以判定一抗是不是有問題。

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16樓2013-09-01 10:44:26

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15樓: Originally posted by 小鞋匠126_ at 2013-08-30 10:00:58
很有可能是這個(gè)蛋白不是你的，而是本體表達(dá)的

這也有可能，但是為什么我的蛋白不顯色呢，抗體的問題？！

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17樓2013-09-02 10:04:14

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beibei9535

榮譽(yù)版主 (職業(yè)作家)

暈暈小版主~ 姑娘你好！

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怎么幫忙啊。。。都沒看懂你寫的什么。。。

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最好的年齡是，那一天，終于知道并且堅(jiān)信自己有多好，不是虛張，不是夸浮，不是眾人捧，是內(nèi)心明明澈澈知道：是的，我就是這么好。

18樓2013-09-03 05:19:55

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