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msms

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8樓: Originally posted by 大海一孤舟 at 2013-08-30 16:14:30
后面的蛋白分不開(kāi)很多時(shí)候都是正常的現(xiàn)象，你可以考慮調(diào)整一下上樣的量，或者增加膠的濃度。

問(wèn)題是以前都能分開(kāi)，一樣的上樣量一樣的濃度

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11樓2013-08-30 16:55:07

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

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9樓: Originally posted by msms at 2013-08-30 16:54:03
是水稻籽粒全蛋白，沒(méi)有到10kd，到30kd就不清晰了，而且以前跑得下面都很清晰...

電泳緩沖液是新配置的嗎？樣品處理用了足夠的DTT或者巰基乙醇了嗎？

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12樓2013-08-31 02:46:54

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czcpudai

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-09-03 20:59:52
gyesang: 回帖置頂 2013-09-03 20:59:53

小于10KD的蛋白，怎么能使用SDS-PAGE跑呢？？？對(duì)于小分子肽，使用Tricine-SDS-PAGE膠進(jìn)行跑，可以分離的比較好。

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13樓2013-08-31 20:26:05

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mamadexiao

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gyesang: 金幣+2, 這種方法樓主有實(shí)踐過(guò)嗎？ 2013-09-03 21:00:17
gyesang: 回帖置頂 2013-09-03 21:00:19

給你個(gè)建議，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分離膠中的純水。

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14樓2013-08-31 20:44:59

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冬蟲(chóng)夏草1

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

你的目的蛋白多大？10KD以下建議用tricine膠跑。

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倚樓聽(tīng)風(fēng)雨，淡看江湖路！

15樓2013-08-31 23:25:21

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引用回帖:

14樓: Originally posted by mamadexiao at 2013-08-31 20:44:59
給你個(gè)建議，如果需要小分子的可以用60%的甘油替代你做分離膠中的純水。

嗯，我試試看，謝謝。

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16樓2013-09-02 08:48:56

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15樓: Originally posted by 冬蟲(chóng)夏草1 at 2013-08-31 23:25:21
你的目的蛋白多大？10KD以下建議用tricine膠跑。

目地蛋白 15-57kd

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17樓2013-09-02 08:49:17

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【答案】應(yīng)助回帖

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流經(jīng)驗(yàn)！ 2013-09-03 21:00:41

我的實(shí)驗(yàn)室做法：濃縮膠5%,分離膠12%；注意Tris-clPH不一樣的（6.8 ，8.8），上樣20ul，100V過(guò)濃縮膠，130V跑結(jié)束就行；有的時(shí)候染液也有可能出問(wèn)題的，建議換一下試試。另外測(cè)緩沖液PH要在溶液溫度25攝氏度，不然差別很大的。

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18樓2013-09-02 10:58:47

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18樓: Originally posted by 514278815 at 2013-09-02 10:58:47
我的實(shí)驗(yàn)室做法：濃縮膠5%,分離膠12%；注意Tris-clPH不一樣的（6.8 ，8.8），上樣20ul，100V過(guò)濃縮膠，130V跑結(jié)束就行；有的時(shí)候染液也有可能出問(wèn)題的，建議換一下試試。另外測(cè)緩沖液PH要在溶液溫度25攝氏度，不 ...

嗯，我的配方是跟你一樣的，我再試試，謝謝啦！

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19樓2013-09-03 20:23:21

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