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ice清玉

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8樓: Originally posted by 三蟄 at 2014-02-20 16:43:54
很可能是點(diǎn)樣問(wèn)題。

應(yīng)該不是...

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11樓2014-02-20 19:31:13

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朱小壞

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【答案】應(yīng)助回帖

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或者是樣留在孔里沒(méi)跑出去，或者膠太厚，緩沖液用久了，太熱了。。。

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12樓2014-02-20 19:34:52

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小套套李

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3樓: Originally posted by ice清玉 at 2014-02-20 13:52:36
我們實(shí)驗(yàn)室稱量多少瓊脂糖，加多少染料都寫(xiě)得清清楚楚貼在墻上的...TAT...一開(kāi)始我也覺(jué)得是我配膠的問(wèn)題，可是marker都很清晰啊...我也覺(jué)著詭異啊...難道就這樣碰運(yùn)氣才能碰上哪次有條帶我才能回收嗎...太悲催了吧 ...

你們實(shí)驗(yàn)室瓊脂糖和染料加多少呢？

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13樓2014-02-20 21:05:03

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西門(mén)吹雪170

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

10樓: Originally posted by ice清玉 at 2014-02-20 19:30:06
5ul 啊...降解也不可能全降解啊...有一次P完后接著跑電泳沒(méi)有帶，在冰箱放了兩天后又跑了一次竟然出帶了......

1、點(diǎn)樣有問(wèn)題，可以在點(diǎn)樣前混勻一下
2、膠沒(méi)問(wèn)題的話，請(qǐng)確定你染色也沒(méi)有問(wèn)題
3、一般PCR產(chǎn)物都是全點(diǎn)，因?yàn)橛械臈l帶是很弱的，量不足看不出結(jié)果

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植根于內(nèi)心的修養(yǎng)；無(wú)需提醒的自覺(jué)；以約束為前提的自由；為別人著想的善良

14樓2014-02-20 21:40:39

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我從遠(yuǎn)方來(lái)，沒(méi)帶走一絲遺憾

15樓2014-02-21 14:30:11

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ice清玉(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-02-23 23:53:47

有可能是放冰箱之后酶繼續(xù)催化PCR 反應(yīng)，如果是你PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)不夠的話，那么P完之后很可能因?yàn)閏opy數(shù)少而不能用肉眼看到條帶，放冰箱一段時(shí)間之后酶可能會(huì)繼續(xù)催化反應(yīng)（反應(yīng)應(yīng)該很慢，但由于PCR是成指數(shù)增長(zhǎng)，所以哪怕是增加了2-3個(gè)反應(yīng)，你的產(chǎn)物的copy數(shù)都會(huì)成指數(shù)增加），導(dǎo)致你再次跑膠時(shí)能看到條帶。這純屬個(gè)人設(shè)想，僅供參考。

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16樓2014-02-22 14:09:19

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永遠(yuǎn)一片天

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

引物的問(wèn)題，引物的稀釋所用的水不同會(huì)出現(xiàn)這種情況，水必須達(dá)到要求，合格的滅菌雙蒸水，不然這種情況會(huì)經(jīng)常出現(xiàn)。

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17樓2014-02-23 10:57:12

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wangpeng227

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【答案】應(yīng)助回帖

說(shuō)說(shuō)你的細(xì)節(jié)吧。

膠怎么制備的？
EB怎么用的？是加在膠里還是后染色？
電泳條件確定一樣嗎？

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18樓2014-02-23 16:27:28

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至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

頭一次詭異可能是膠沒(méi)回收干凈，后一次可能是dna降解了

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有些東西因?yàn)榈貌坏蕉兊妹篮�，有些東西因?yàn)閾碛卸兊脧涀阏滟F！

19樓2014-04-04 14:16:51

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