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buxiangxue

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10樓: Originally posted by yangfanv at 2014-06-17 12:35:07
23ug/ug！�。�！樓主肯定搞錯(cuò)了～～樓主定量怎么定的...

考馬斯亮蘭法 Bradford法 1mg/mlBSA 0.15mol/lNacl 考馬斯亮藍(lán)G-250 標(biāo)準(zhǔn)曲線 R平方0.99

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11樓2014-06-17 14:31:31

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buxiangxue

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10樓: Originally posted by yangfanv at 2014-06-17 12:35:07
23ug/ug！！��！樓主肯定搞錯(cuò)了～～樓主定量怎么定的...

用考馬斯亮蘭法Bradford法考馬斯亮蘭G-250 5ML 0.15mol/L Nacl 1mg/ml BSA

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12樓2014-06-17 18:17:55

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ganchao1776

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

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9樓: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 11:36:17
條帶是彌散的么，我剛做蛋白沒(méi)經(jīng)驗(yàn) 蛋白被降解？我的蛋白是固體保存的用樣品處理液處理過(guò)之后蛋白不就變性了嘛不過(guò)處理的時(shí)候都是常溫，哪里有問(wèn)題，求指教...

可能是在你提取蛋白的過(guò)程中，你再做一下試吧，具體問(wèn)題了在那里我也不清楚的，從你的電泳圖上我只能看到這么多

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13樓2014-06-17 21:02:55

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yangfanv

鐵蟲 (小有名氣)

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11樓: Originally posted by buxiangxue at 2014-06-17 14:31:31
考馬斯亮蘭法 Bradford法 1mg/mlBSA 0.15mol/lNacl 考馬斯亮藍(lán)G-250 標(biāo)準(zhǔn)曲線 R平方0.99...

樓主的定量有問(wèn)題啊～～都23ug/ul還上了15ul樣品～～你算算你一共有多少總蛋白～一般我們的SDS-PAGE膠不可能有這個(gè)承載量吧～所以我覺(jué)得樓主定量可能出問(wèn)題了～～即便降解了那下面條帶應(yīng)該也很濃吧～～

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路要慢慢地走～但不能停

14樓2014-06-18 08:50:52

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qlw4567

鐵桿木蟲 (著名寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
youlinglyw: 金幣+3, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，生物科學(xué)有你更精彩！ 2014-06-18 11:31:03

除了你能排除是以上同學(xué)們說(shuō)的你濃度的問(wèn)題外，我覺(jué)得如果你所有濃度都是這么淺，是不是染色的時(shí)候時(shí)間不夠呢？

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努力和媳婦一起上完博士

15樓2014-06-18 09:05:17

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buxiangxue

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14樓: Originally posted by yangfanv at 2014-06-18 08:50:52
樓主的定量有問(wèn)題啊～～都23ug/ul還上了15ul樣品～～你算算你一共有多少總蛋白～一般我們的SDS-PAGE膠不可能有這個(gè)承載量吧～所以我覺(jué)得樓主定量可能出問(wèn)題了～～即便降解了那下面條帶應(yīng)該也很濃吧～～...

確實(shí)算錯(cuò)啦

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16樓2014-06-18 11:20:48

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buxiangxue

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13樓: Originally posted by ganchao1776 at 2014-06-17 21:02:55
可能是在你提取蛋白的過(guò)程中，你再做一下試吧，具體問(wèn)題了在那里我也不清楚的，從你的電泳圖上我只能看到這么多...

謝謝

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17樓2014-06-18 11:24:23

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【答案】應(yīng)助回帖

上樣量太少，SDS-PAGE考染靈敏度在單條帶0.1ug，低了就銀染吧，要不就蛋白濃縮，加大上樣量

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愛(ài)拼才會(huì)贏

18樓2014-06-20 22:34:40

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pengchenping

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【答案】應(yīng)助回帖

你的樣品濃度太低啦

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19樓2014-07-07 20:37:21

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院士陳

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【答案】應(yīng)助回帖

這是必須的你 marker是定量的但是你蛋白的量又不是按照同一濃度，我是指在你取樣的時(shí)候樣本的量

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20樓2015-03-10 18:15:25

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