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flhua

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bachelordom

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
baidiliulian(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-31 09:05:00

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2樓: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-21 11:36:09
全是野生菌還是重組效率不高與篩選效率低的問(wèn)題
1.現(xiàn)在有種單交換的無(wú)縫敲除，重組幾率肯定比雙交換高。
2.既然你是無(wú)縫克隆，那你后期是怎么篩選的？缺陷型嗎？

1，重組概率不是很低，能篩選到單臂交換菌株，就是說(shuō)可以發(fā)生重組；但是每次從哪個(gè)臂交換上，從哪個(gè)臂又交換下來(lái)；
2，單純敲除掉某個(gè)基因，考察該基因功能，不是營(yíng)養(yǎng)缺陷性突變株構(gòu)建。

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只要有夢(mèng)想，堅(jiān)持就一定能實(shí)現(xiàn)

11樓2014-07-30 17:40:34

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金書(shū)豆豆

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用什么載體敲除？

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12樓2014-07-30 23:58:13

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zhaodahe

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

9樓: Originally posted by flhua at 2014-07-30 17:34:44
我已經(jīng)鑒定是單臂交換了，希望通過(guò)另外一個(gè)臂交換得到突變株，即雙交換（目的突變株）。可是好像單臂交換后，再次進(jìn)行篩選又從相同臂交換，變回野生型，很是郁悶，篩了2000個(gè)克隆，50個(gè)第二次交換株，但都是野生型 ...

不知道你用的什么篩選標(biāo)記？覺(jué)得你的雙交換效率偏低，2000個(gè)才有50個(gè)；在沒(méi)有壓力的條件下，于液體培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接培養(yǎng)兩次，可能會(huì)提高雙交換的比例。

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13樓2014-07-31 09:19:33

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13樓: Originally posted by zhaodahe at 2014-07-31 09:19:33
不知道你用的什么篩選標(biāo)記？覺(jué)得你的雙交換效率偏低，2000個(gè)才有50個(gè)；在沒(méi)有壓力的條件下，于液體培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接培養(yǎng)兩次，可能會(huì)提高雙交換的比例。...

請(qǐng)問(wèn) 在液體培養(yǎng)基中發(fā)生二次交換時(shí)，要加萘啶酮酸嗎，在蔗糖篩選培養(yǎng)基中加萘啶酮酸嗎，請(qǐng)問(wèn)萘啶酮酸的作用是什么

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14樓2015-03-09 16:15:00

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9樓: Originally posted by flhua at 2014-07-30 17:34:44
我已經(jīng)鑒定是單臂交換了，希望通過(guò)另外一個(gè)臂交換得到突變株，即雙交換（目的突變株）�？墒呛孟駟伪劢粨Q后，再次進(jìn)行篩選又從相同臂交換，變回野生型，很是郁悶，篩了2000個(gè)克隆，50個(gè)第二次交換株，但都是野生型 ...

請(qǐng)問(wèn)樓主是如何確定已經(jīng)發(fā)生單交換的。我有一個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教，發(fā)生了接合轉(zhuǎn)移之后，在抗性平板上涂布能夠生長(zhǎng)的菌落是否可以初步認(rèn)為質(zhì)粒已經(jīng)轉(zhuǎn)入受體菌，還是可能已經(jīng)發(fā)生了單交換，是否存在一種可能性是，質(zhì)粒轉(zhuǎn)入后并沒(méi)有整合到基因組中？

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總有人要贏，為什么那個(gè)不能是我

15樓2017-11-27 21:52:47

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10樓: Originally posted by flhua at 2014-07-30 17:35:53
每次P出來(lái)都是野生型長(zhǎng)帶，2000個(gè)篩選到50多個(gè)敏感菌株，但都恢復(fù)成野生型了。...

樓主的意思是，篩選到雙交換之后再進(jìn)行傳代又恢復(fù)成野生型了？目前進(jìn)展如何了？我還卡在接合轉(zhuǎn)移的地方，能不能給個(gè)聯(lián)系方式。

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總有人要贏，為什么那個(gè)不能是我

16樓2017-12-13 21:22:19

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