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金輝_萍

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4樓: Originally posted by younghe at 2014-07-21 16:21:19
啟動(dòng)子是比較難擴(kuò)的，多設(shè)計(jì)幾對(duì)引物，用GC buffer擴(kuò)增

是反映體系的問題啊我p了20來次昨晚上p出來了謝謝大家萬分感謝

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11樓2014-07-22 21:28:01

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5樓: Originally posted by primer022 at 2014-07-21 16:51:10
別pcr了，去全基因合成吧，也不貴，1ooo多吧。直接把你需要的片段克隆到載體上，當(dāng)然你可以前后加上你需要的酶切位點(diǎn)

是反映體系的問題啊我p了20來次昨晚上p出來了謝謝大家萬分感謝
想法是好的不過老板不肯花錢

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12樓2014-07-22 21:28:31

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6樓: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-21 17:43:08
電泳圖是完全沒有東西還是有雜帶？模板是基因組？可以往pcr體系中加點(diǎn)DMSO終濃度為百分之5，模板稍微多加點(diǎn)，退火溫度降3-5度先看看有無帶再說

是反映體系的問題啊我p了20來次昨晚上p出來了謝謝大家萬分感謝

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13樓2014-07-22 21:28:46

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9樓: Originally posted by 劉芬玲 at 2014-07-21 20:46:07
可能是引物的問題，重新設(shè)計(jì)一對(duì)試試

是反映體系的問題啊我p了20來次昨晚上p出來了謝謝大家萬分感謝

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14樓2014-07-22 21:28:59

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8樓: Originally posted by Crazyyzf at 2014-07-21 19:49:15

...

請(qǐng)文明點(diǎn)啊大家都是經(jīng)驗(yàn)積累啊都沒錯(cuò) 謝謝

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15樓2014-07-22 21:29:53

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13樓: Originally posted by 金輝_萍 at 2014-07-22 21:28:46
是反映體系的問題啊我p了20來次昨晚上p出來了謝謝大家萬分感謝...

是反應(yīng)體系哪里出的問題，是不是加了后DMSO出來的？

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大家相互幫助哈

16樓2014-07-22 21:56:10

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15樓: Originally posted by 金輝_萍 at 2014-07-22 21:29:53
請(qǐng)文明點(diǎn)啊大家都是經(jīng)驗(yàn)積累啊都沒錯(cuò) 謝謝...

我在調(diào)侃師兄沒有不文明～

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17樓2014-07-22 23:52:36

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引物設(shè)計(jì)，還有引物的最合適的溫度需要摸索。

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18樓2014-07-25 15:50:24

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16樓: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-22 21:56:10
是反應(yīng)體系哪里出的問題，是不是加了后DMSO出來的？...

沒有啊我就退火溫度時(shí)間一直在換

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19樓2014-07-25 19:28:54

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17樓: Originally posted by Crazyyzf at 2014-07-22 23:52:36
我在調(diào)侃師兄沒有不文明～
...

嗯

20樓2014-07-25 19:29:11

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