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9樓: Originally posted by 1020490511 at 2014-09-04 10:49:09
問(wèn)一下樓主，你用的A液和B液分別是什么？我的重組his標(biāo)簽蛋白掛不上柱子，不知原因。謝謝！

我們這里也遇到過(guò)不掛柱的問(wèn)題，不過(guò)拿出菌種重新做又好了，估計(jì)是因?yàn)榫N退化。
菌種退化不止是有不掛柱的情況，還會(huì)出現(xiàn)蛋白沒(méi)活性的情況，這些還需要注意。

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11樓2014-09-04 12:23:37

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5樓: Originally posted by flll2014 at 2014-09-02 20:52:48
純化標(biāo)簽和目的蛋白之間本來(lái)就有酶切位點(diǎn)，我是直接拿酶去切his標(biāo)簽的，切完之后，重新掛柱，正常的應(yīng)該是標(biāo)簽掛柱，目的蛋白流穿，但是現(xiàn)在的情況是標(biāo)簽和蛋白都結(jié)合在柱子上了。用高濃度咪唑洗脫后既有標(biāo)簽又有目 ...

既然目的蛋白沒(méi)有流穿，那就低濃度洗目的蛋白，高濃度洗標(biāo)簽唄

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12樓2014-09-04 12:30:25

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11樓: Originally posted by 璧月 at 2014-09-04 12:23:37
我們這里也遇到過(guò)不掛柱的問(wèn)題，不過(guò)拿出菌種重新做又好了，估計(jì)是因?yàn)榫N退化。
菌種退化不止是有不掛柱的情況，還會(huì)出現(xiàn)蛋白沒(méi)活性的情況，這些還需要注意。...

菌種退化什么意思

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13樓2014-09-04 13:05:32

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12樓: Originally posted by 璧月 at 2014-09-04 12:30:25
既然目的蛋白沒(méi)有流穿，那就低濃度洗目的蛋白，高濃度洗標(biāo)簽唄...

嗯，是的，正打算試試呢

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14樓2014-09-04 13:07:04

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13樓: Originally posted by flll2014 at 2014-09-04 13:05:32
菌種退化什么意思...

發(fā)生變異，原來(lái)需要的特性消失了唄

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15樓2014-09-04 22:53:21

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13樓: Originally posted by flll2014 at 2014-09-04 13:05:32
菌種退化什么意思...

保菌種，保質(zhì)粒，就不需要重新從頭做了呀

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16樓2014-09-04 22:56:53

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已經(jīng)做測(cè)序了，測(cè)序正確。應(yīng)該不會(huì)退化吧？表達(dá)的蛋白應(yīng)該有活性吧？

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17樓2014-09-05 09:41:35

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