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7樓: Originally posted by 18761615793 at 2015-02-03 09:39:51
pET載體系列：一種類(lèi)型需要加IPTG誘導(dǎo)
另一種類(lèi)型不需要加IPTG誘導(dǎo)哦

...

哪一種類(lèi)型不需要誘導(dǎo)？

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11樓2015-02-06 17:54:05

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10樓: Originally posted by biofanie at 2015-02-05 12:48:25
用于蛋白質(zhì)純化，包含一個(gè)his tag, 因此可用nickle柱子純化蛋白，是一個(gè)比較常用的載體，我經(jīng)常用，好使。
其圖譜和序列圖見(jiàn)附件，作為你的參考，其中序列圖上有詳細(xì)的酶切位點(diǎn)圖，可直接使用。

我現(xiàn)在也面臨著這個(gè)問(wèn)題，老板讓我利用SUMO構(gòu)建重組蛋白在原核生物中表達(dá)，我選用的是pET-3C載體，老板說(shuō)這個(gè)載體不適合折疊蛋白表達(dá)，讓我換一個(gè)，我覺(jué)得你給的pET-28a挺合適的，有沒(méi)有的好的推薦的，PET-SUMO有用過(guò)嗎？

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12樓2015-03-23 22:04:36

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5樓: Originally posted by 18761615793 at 2015-02-03 09:06:17
用處：pET是一種載體，可以將一段序列（目的基因）加到這個(gè)載體上，形成一個(gè)環(huán)狀的質(zhì)粒，然后將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行表達(dá) ，能很好的將目的基因表達(dá)出來(lái)。
公司：Novagen一直致力于研發(fā)pET系統(tǒng)，還有自 ...

我看懂你的解釋?zhuān)蚁雴?wèn)下選擇不同的載體對(duì)表達(dá)有影響嗎？PET-SUMO有用過(guò)嗎？由于第一次接觸，是個(gè)小白，今天寫(xiě)實(shí)驗(yàn)方案選擇的pET-3C,這個(gè)載體是從別人論文中看到的，而老板說(shuō)不適合折疊表達(dá)的蛋白，弄的我都不知道選哪個(gè)載體。有沒(méi)有好推薦的？謝謝你

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13樓2015-03-23 22:08:00

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引用回帖:

13樓: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-23 22:08:00
我看懂你的解釋?zhuān)蚁雴?wèn)下選擇不同的載體對(duì)表達(dá)有影響嗎？PET-SUMO有用過(guò)嗎？由于第一次接觸，是個(gè)小白，今天寫(xiě)實(shí)驗(yàn)方案選擇的pET-3C,這個(gè)載體是從別人論文中看到的，而老板說(shuō)不適合折疊表達(dá)的蛋白，弄的我都不知道 ...

不同的載體當(dāng)然對(duì)表達(dá)有影響啊。我們一般的如果是在原核中表達(dá)的話(huà)，pET24a 28a 30a 32a 43.1a 20d 都是常用的，因?yàn)樽鰧?shí)驗(yàn)嘛，就是一個(gè)摸索的過(guò)程，所以每次做實(shí)驗(yàn)都是選擇2-3種載體進(jìn)行摸索，最終確定最佳的載體。pET -sumo沒(méi)有用過(guò)，這個(gè)載體在原核表達(dá)中應(yīng)該不熱門(mén)吧

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14樓2015-03-24 08:45:12

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14樓: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-24 08:45:12
不同的載體當(dāng)然對(duì)表達(dá)有影響啊。我們一般的如果是在原核中表達(dá)的話(huà)，pET24a 28a 30a 32a 43.1a 20d 都是常用的，因?yàn)樽鰧?shí)驗(yàn)嘛，就是一個(gè)摸索的過(guò)程，所以每次做實(shí)驗(yàn)都是選擇2-3種載體進(jìn)行摸索，最終確定最佳的載體 ...

哦，知道了，您剛剛說(shuō)的幾種載體，有那種是比較好用的。我也是想在原核生物中表達(dá)。

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15樓2015-03-24 10:08:06

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15樓: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 10:08:06
哦，知道了，您剛剛說(shuō)的幾種載體，有那種是比較好用的。我也是想在原核生物中表達(dá)。
...

我剛剛說(shuō)的，全部都好用，因?yàn)槲覀兌冀?jīng)常用的，真的

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16樓2015-03-24 15:50:56

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16樓: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-24 15:50:56
我剛剛說(shuō)的，全部都好用，因?yàn)槲覀兌冀?jīng)常用的，真的...

我不是希望它好用，我喜歡它的實(shí)用性強(qiáng)，因?yàn)樽鲅邪l(fā)，所以希望表達(dá)效率要高，不好意思哈，第一次接觸，老板就是一句話(huà)自己查文獻(xiàn)去，

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17樓2015-03-24 16:47:56

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17樓: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 16:47:56
我不是希望它好用，我喜歡它的實(shí)用性強(qiáng)，因?yàn)樽鲅邪l(fā)，所以希望表達(dá)效率要高，不好意思哈，第一次接觸，老板就是一句話(huà)自己查文獻(xiàn)去，...

我說(shuō)的好用就是實(shí)用性強(qiáng)的意思啊，你表達(dá)不同的蛋白（當(dāng)然前提是在原核中表達(dá)）想要確定最佳載體，你得嘗試各種載體才能確定啊。
還有蛋白表達(dá)的表達(dá)率高低，載體的選擇只是一方面的，有時(shí)候都得進(jìn)行幾十個(gè)條件的優(yōu)化對(duì)比才能找到最佳組合呢，尤其是基因，你在表達(dá)之前就應(yīng)該優(yōu)化，不然基因本身與載體宿主菌就不相容的話(huà)，怎么選擇載體怎么優(yōu)化實(shí)驗(yàn)都不會(huì)成功，不是包涵體就是沒(méi)活性，總之祝福你了
http://www.detaibio.com/gene-expression-optimization.html
對(duì)優(yōu)化的內(nèi)容介紹的挺詳細(xì)，推薦給你看看

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18樓2015-03-24 17:13:54

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18樓: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-24 17:13:54

我說(shuō)的好用就是實(shí)用性強(qiáng)的意思啊，你表達(dá)不同的蛋白（當(dāng)然前提是在原核中表達(dá)）想要確定最佳載體，你得嘗試各種載體才能確定啊。
還有蛋白表達(dá)的表達(dá)率高低，載體的選擇只是一方面的，有時(shí)候都得進(jìn)行幾十 ...

我的目的基因就是一段確定的序列，這個(gè)在這之前也可以進(jìn)行改造嗎？我不知道，不過(guò)你說(shuō)的有道理，明天和老板說(shuō)書(shū)哦，先拿兩種載體摸索下，這樣看文獻(xiàn)找也不是問(wèn)題，選兩個(gè)載體都有相同的兩個(gè)酶切位點(diǎn)，估計(jì)也便宜點(diǎn)，把我的目的序列連上SUMO直接重組在構(gòu)建都載體上好了，不知道老板同不同意？

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19樓2015-03-24 19:42:03

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19樓: Originally posted by wuwenmei at 2015-03-24 19:42:03
我的目的基因就是一段確定的序列，這個(gè)在這之前也可以進(jìn)行改造嗎？我不知道，不過(guò)你說(shuō)的有道理，明天和老板說(shuō)書(shū)哦，先拿兩種載體摸索下，這樣看文獻(xiàn)找也不是問(wèn)題，選兩個(gè)載體都有相同的兩個(gè)酶切位點(diǎn)，估計(jì)也便宜點(diǎn) ...

就我之前給你的那個(gè)網(wǎng)址上，上面有一段對(duì)基因合成之前的優(yōu)化步驟，就是密碼子優(yōu)化的那一步。當(dāng)然可以改造啊，而且表達(dá)出的蛋白不會(huì)變的，你可以仔細(xì)的看看

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20樓2015-03-25 08:36:18

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