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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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10樓: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-09 20:28:44
不能裝滿,因?yàn)槟汶娏讼潞笠尤?毫升培養(yǎng)基的
...

我說的裝滿是兩個銀色電極之間 大約800ul  不是裝到杯口   電火花是因?yàn)槭裁礇]洗干凈啊?屋里只有0.4mm的 好像還有個0.1mm的 不知道能不能用呢還      老師嘛肯定是用現(xiàn)有的 不可能給買別的東西 唉
簡簡單單才是真
11樓2015-06-10 15:42:23
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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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8樓: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-09 18:01:15
電火花出現(xiàn)在杯口還是杯內(nèi)?你的電轉(zhuǎn)參數(shù)是如何設(shè)置的?你的DNA和感受太是如何制備的?
...

參數(shù)是2KV,200Ω,25uf,5s

dna是酶切三小時后用乙醇沉淀的

酵母感受態(tài)就是最普通的制備方法 OD600=1.0  收集后水洗兩次  山梨醇洗一次 1ml山梨醇重懸 80ul每管分裝的
簡簡單單才是真
12樓2015-06-10 15:46:14
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luwei13566

木蟲 (正式寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
小橘子2013: 金幣+6, ★★★★★最佳答案 2015-06-11 15:53:27
引用回帖:
12樓: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-10 15:46:14
參數(shù)是2KV,200Ω,25uf,5s

dna是酶切三小時后用乙醇沉淀的

酵母感受態(tài)就是最普通的制備方法 OD600=1.0  收集后水洗兩次  山梨醇洗一次 1ml山梨醇重懸 80ul每管分裝的...

你放電時間有5秒鐘?而不是5ms?
如果放電時間確實(shí)是5s,那你出現(xiàn)電火花的原因不是由于酵母細(xì)胞和DNA預(yù)處理不干凈使得離子濃度過大導(dǎo)致的短路放電。而是你加樣過少導(dǎo)致的電極杯兩端平行板根本沒有連通導(dǎo)致的電阻過大,平行板兩端長時間維持2000v左右的高電壓直到電弧產(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移。最簡單的處理辦法就是多加樣,讓電路連通,放電時間自然會回到正常范圍內(nèi)。
1. 4mm杯子容量比較大,至少在2ml以上,電場強(qiáng)度相對較低。LZ多加樣的思路是對的,也不需要太多,400ul足以讓電路連通,2Kv夠用了,電擊后1M山梨醇添加量1ml——2ml都可以。
2.  1mm的杯子同樣電壓下提供的場強(qiáng)非常強(qiáng),所以如果換用1mm的杯子,按照LZ你原來的80ul完全可以連通電路,電壓在800v——1500v之間,其與參數(shù)維持不變。
大家相互幫助哈
13樓2015-06-11 02:10:21
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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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13樓: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-11 02:10:21
你放電時間有5秒鐘?而不是5ms?
如果放電時間確實(shí)是5s,那你出現(xiàn)電火花的原因不是由于酵母細(xì)胞和DNA預(yù)處理不干凈使得離子濃度過大導(dǎo)致的短路放電。而是你加樣過少導(dǎo)致的電極杯兩端平行板根本沒有連通導(dǎo)致的電阻過 ...

好的 受教了 謝謝你的幫助   
現(xiàn)在還有一個問題,就是酵母誘導(dǎo)表達(dá)的時候用BMGY長到OD600=2-6,收集菌體再用一定BMMY重懸使其OD600=1.從這時開始計(jì)算每24H添加一次甲醇是吧?剛換完培養(yǎng)基是不能加甲醇是是嗎?
簡簡單單才是真
14樓2015-06-11 15:53:01
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luwei13566

木蟲 (正式寫手)

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14樓: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-11 15:53:01
好的 受教了 謝謝你的幫助   
現(xiàn)在還有一個問題,就是酵母誘導(dǎo)表達(dá)的時候用BMGY長到OD600=2-6,收集菌體再用一定BMMY重懸使其OD600=1.從這時開始計(jì)算每24H添加一次甲醇是吧?剛換完培養(yǎng)基是不能加甲醇是是嗎?...

換培養(yǎng)基的時候就加上甲醇。
大家相互幫助哈
15樓2015-06-11 22:12:00
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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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15樓: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-11 22:12:00
換培養(yǎng)基的時候就加上甲醇。...

那我有個未誘導(dǎo)的對照應(yīng)該用什么補(bǔ)齊呢?
簡簡單單才是真
16樓2015-06-12 08:25:44
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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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15樓: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-11 22:12:00
換培養(yǎng)基的時候就加上甲醇。...

還想就是用補(bǔ)齊甲醇的BMMY培養(yǎng)基來調(diào)PH值呢  還是調(diào)好PH值后再按1%加甲醇呢?
簡簡單單才是真
17樓2015-06-12 08:28:14
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小橘子2013

新蟲 (小有名氣)

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17樓: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-12 08:28:14
還想就是用補(bǔ)齊甲醇的BMMY培養(yǎng)基來調(diào)PH值呢  還是調(diào)好PH值后再按1%加甲醇呢?...

我的意思是 如果我想用100%甲醇去誘導(dǎo)每次就加幾毫升,而原來的用10X甘油的時候是加十倍的量   對整體的體積和濃度會有影響吧  還是把甲醇也配成10%每次加1%這樣應(yīng)該對培養(yǎng)基的濃度不會有影響了吧
簡簡單單才是真
18樓2015-06-12 08:56:39
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luwei13566

木蟲 (正式寫手)

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17樓: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-12 08:28:14
還想就是用補(bǔ)齊甲醇的BMMY培養(yǎng)基來調(diào)PH值呢  還是調(diào)好PH值后再按1%加甲醇呢?...

BMMY里面的pH6.0的磷酸鉀就是提供緩沖作用的,不需要額外調(diào)pH的。
大家相互幫助哈
19樓2015-06-12 14:54:57
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luwei13566

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18樓: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-12 08:56:39
我的意思是 如果我想用100%甲醇去誘導(dǎo)每次就加幾毫升,而原來的用10X甘油的時候是加十倍的量   對整體的體積和濃度會有影響吧  還是把甲醇也配成10%每次加1%這樣應(yīng)該對培養(yǎng)基的濃度不會有影響了吧...

甲醇母液濃度較低會讓培養(yǎng)基體積升高,但是只要提前算好增加的體積以及與其相匹配的甲醇添加量,添加甲醇的終濃度一致就可以,對培養(yǎng)基影響并不是很大。
大家相互幫助哈
20樓2015-06-12 14:57:44
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