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huangyan.88.新蟲 (小有名氣)
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常見的腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物造模方法 已有1人參與
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腎間質(zhì)纖維化 (renalinterstitialfibrosis，RIF)，既是慢性進(jìn)展性腎臟病共同典型的病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，又是決定腎功能衰竭進(jìn)程的關(guān)鍵因素，是多種慢性腎臟病長(zhǎng)期遷延，最終導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的主要病理基礎(chǔ)，由慢性腎小管間質(zhì)損傷導(dǎo)致的腎間質(zhì)纖維化已成為幾乎所有腎臟疾病的共同最終結(jié)局。各種原因?qū)е碌穆阅I功能衰竭與腎小管間質(zhì)纖維化的關(guān)系較與腎小球損傷的關(guān)系更為密切，RIF的研究成為近年來腎臟病學(xué)界的主流與熱點(diǎn)，MDL已構(gòu)建成熟的RIF動(dòng)物模型。 動(dòng)物的選擇主要是大鼠。造模方法 造成腎小管間質(zhì)纖維化的方法主要有手術(shù) (單側(cè)輸尿管結(jié)扎、腎臟缺血-再灌注等-) 和藥物 (環(huán)孢素 A、氨基糖苷類抗生素、腎毒性藥物等) 兩大類。其中, 目前應(yīng)用最廣泛的腎小管間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型是單側(cè)輸尿管梗阻 (UUO) 動(dòng)物模型。 單側(cè)輸尿管梗阻動(dòng)物模型UUO模型是研究腎間質(zhì)纖維化發(fā)生機(jī)制、腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和評(píng)價(jià)腎纖維化治療方法的理想模型。 造模方法：大鼠以戊巴比妥鈉（50mg/kg body weight）腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪毛后用碘酒75%酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸尿管，用5-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點(diǎn)位于左腎下極水平，在兩道結(jié)扎點(diǎn)中點(diǎn)將輸尿管切斷，逐層縫合。 模型驗(yàn)證：大鼠術(shù)后切口無(wú)感染、出血、開裂；大鼠活動(dòng)狀態(tài)尚良好，飲食量減少，毛色稍有暗淡；左側(cè)季肋區(qū)可觸及腫大明顯，部分可見左側(cè)變大凸起；尿化驗(yàn)檢測(cè)24 h尿蛋白增加，血生化檢測(cè)血清肌酐、尿素氮升高；腎組織病理可見典型腎間質(zhì)纖維化的表現(xiàn)，腎小球出現(xiàn)硬化，系膜細(xì)胞和基質(zhì)彌漫性輕微增生，腎小管萎縮明顯，呈多灶狀或片狀，部分出現(xiàn)腫脹、空泡變性或脫落、刷狀緣消失等病理改變，腎間質(zhì)纖維化、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，若腎臟無(wú)變化或萎縮，腹腔出現(xiàn)腹水，或?qū)嶒?yàn)過程中出現(xiàn)死亡都可判定該模型造模失敗。 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)：大鼠于術(shù)后2周、4周開腹于下腔靜脈采血，采血后使用4℃生理鹽水灌注循環(huán)系統(tǒng)，待腎臟血色消失后分離腎臟留取標(biāo)本，并記錄腎臟重量，肉眼觀察外觀，將腎臟切為3塊，置于10%多聚甲醛溶液中常溫固定一夜。血液于4℃離心分離留取血清，并置于-80℃超低溫冰箱中備檢。 腎臟病理檢測(cè)：將已固定的腎組織沖洗、脫水、透明處理2次，后浸蠟、包埋、冷卻后切成2μm厚切片，染色前常規(guī)脫蠟，沖洗去離子，行HE染色和Masson染色。光鏡下觀察各組標(biāo)本腎小球、腎小管和腎間質(zhì)病理情況使用彩色病理分析系統(tǒng)拍照，計(jì)算纖維化面積的百分比。 生化檢測(cè)：全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白。 優(yōu)點(diǎn)：模型成功率高，對(duì)動(dòng)物損傷小、死亡率低。方法簡(jiǎn)便，病變均一，有較好的重復(fù)性，手術(shù)成功率>95%。 缺點(diǎn)：大鼠單側(cè)輸尿管梗阻屬于急性機(jī)械性損傷，不能適應(yīng)腎小管和間質(zhì)損傷及其纖維化的所有情況，但是該方法能夠在短期內(nèi)造成纖維化，就研究腎間質(zhì)纖維化的發(fā)病規(guī)律及機(jī)制探討而言，是一種較為快速、可靠的動(dòng)物模型。 造模方法： 給鹽耗竭大鼠皮下注射環(huán)孢素 A（cyclosporineA，CsA）15 mg/kg/d，共28d。 應(yīng)用：本模型主要是用來研究 CsA引起 RIF的作用機(jī)制, 尋找出預(yù)防 CsA腎毒性的新藥物。主要缺點(diǎn)是造模費(fèi)用昂貴, 具有肝臟毒性, 且因服用 CsA所致的 RIF在所有腎間質(zhì)纖維化中所占比例有限, 纖維化進(jìn)程異于一般梗阻性原因所致RIF, 限制了其應(yīng)用價(jià)值。 總結(jié) UUO模型制作相對(duì)簡(jiǎn)單，有較好的重復(fù)性，腎間質(zhì)纖維化發(fā)生迅速，可觀察到腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程。因此，UUO模型是一種研究腎纖維化發(fā)生機(jī)制、腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和評(píng)價(jià)腎纖維化治療方法的理想模型。 |
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約翰yh
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能否請(qǐng)教一下樓主，環(huán)孢素皮下注射時(shí)是用無(wú)水乙醇溶解環(huán)孢素粉末嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2024-11-03 21:27:03
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