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MarchZR

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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引用回帖:

19樓: Originally posted by 湖南戴鵬輝 at 2016-01-27 16:31:02
好的，謝謝大神...

低溫誘導(dǎo)15度也可以嘗試

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21樓2016-01-28 11:39:59

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掌控惡魔

新蟲(chóng) (小有名氣)

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一般和破碎的條件沒(méi)有關(guān)系，理論上可能影響而已，主要還是和你基因設(shè)計(jì)的問(wèn)題，你可以重新設(shè)計(jì)。也可以嘗試重新摸索表達(dá)的條件，時(shí)間、誘導(dǎo)劑加入點(diǎn)，溫度等等方面進(jìn)行著手就可以免去之前的基因設(shè)計(jì)了。
不過(guò)你的目的蛋白已經(jīng)表達(dá)了，看你對(duì)于蛋白的要求，并不是說(shuō)包涵體的蛋白不能用，我們每年都純化百來(lái)個(gè)的包涵體蛋白。也沒(méi)啥影響，你現(xiàn)在可以最好了解一下你用包涵體做的話(huà)有沒(méi)有問(wèn)題

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22樓2016-02-03 10:30:10

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hc2015

新蟲(chóng) (小有名氣)

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nono2009: 金幣-20, 應(yīng)助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 注冊(cè)商家也只能在廣告區(qū)發(fā)廣告，其它區(qū)發(fā)廣告仍屬違規(guī) 2016-05-05 22:14:13

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23樓2016-02-15 11:36:10

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francstone

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這是包涵體，就是蛋白沒(méi)有正確折疊，造成聚集后沉淀。改進(jìn)方法：首選是改變buffer的條件，其次是換表達(dá)體系，比如酵母或者昆蟲(chóng)細(xì)胞，293細(xì)胞；最后就是分析序列，改變表達(dá)蛋白的長(zhǎng)度

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24樓2016-02-15 20:32:56

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francstone

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忘了說(shuō)，包涵體變復(fù)性也是個(gè)選擇

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25樓2016-02-15 20:33:56

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湖南戴鵬輝

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引用回帖:

20樓: Originally posted by MarchZR at 2016-01-28 11:39:30
遇到包涵體的情況最先考慮的不是你破碎的哪些條件等，那都是次要的，不足以導(dǎo)致包涵體的形成。你現(xiàn)在有兩條路可以選擇：要不就繼續(xù)純化包涵體，最后復(fù)性得到蛋白。要不就重新的設(shè)計(jì)基因合成新的質(zhì)粒，再次表達(dá)然后純 ...

謝謝

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好好生活，好好工作

26樓2016-03-11 20:18:46

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想請(qǐng)教一下，這個(gè)照片是用什么照的

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27樓2016-04-28 14:51:40

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chengo12c

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包涵體，建議18℃誘導(dǎo)過(guò)夜，看看表達(dá)情況，如果還不行的話(huà)，就像上面的幾位所言，8M尿素變性，再純化，復(fù)性。至少這樣獲得的蛋白可以用于PULL DOWN

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28樓2016-04-28 15:59:13

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

27樓: Originally posted by 麥子果樹(shù) at 2016-04-28 14:51:40
想請(qǐng)教一下，這個(gè)照片是用什么照的

我覺(jué)得應(yīng)該是用掃描儀掃的

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29樓2016-04-28 15:59:53

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對(duì)了，有個(gè)BL21

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30樓2016-04-28 16:00:51

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