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川大太行

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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我也覺(jué)得是跑的時(shí)間太長(zhǎng)了，你可以提高電壓縮短時(shí)間試試

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不懼不惑向陽(yáng)而生

11樓2016-01-22 19:51:52

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夏天的普洱茶

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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引用回帖:

6樓: Originally posted by 一個(gè)不小心就 at 2016-01-22 13:54:27
我覺(jué)的應(yīng)該是的。但是的蛋白是時(shí)間短了跑不開(kāi)，真是個(gè)棘手問(wèn)題，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有什么建議...

我的蛋白70kda, 一般120的電壓跑2個(gè)小時(shí)，我們用的是買(mǎi)來(lái)的梯度膠，不知道自己制的膠會(huì)怎么樣。但是我覺(jué)得60v 10h這個(gè)條件不太合適，以前國(guó)內(nèi)他們自己制的膠好像用150V還是200V跑的，我記不清楚了，但是肯定超過(guò)100V。

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12樓2016-01-23 01:29:45

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lvsd

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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一個(gè)不小心就: 金幣+3 2016-01-23 13:44:43

以前的實(shí)驗(yàn)室?guī)资藥缀鯚o(wú)一例外的用200V跑膠，40分鐘到個(gè)把小時(shí)跑完。室溫二十一二度，跑完時(shí)有點(diǎn)發(fā)熱，估計(jì)最高能達(dá)到30度以上。樓主提高電壓以加快速度看看問(wèn)題能否解決？
另外是否存在膠的邊緣厚度與中間不一致的問(wèn)題呢？還有電極絲是否變形了？拉直了看看。

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13樓2016-01-23 06:39:29

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noblefire

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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一個(gè)不小心就: 金幣+4 2016-01-23 13:46:23

膠是不是新鮮配置的，你跑的太謹(jǐn)慎了。我們實(shí)驗(yàn)室如果不是需要發(fā)表文章用一般用200V甚至到240V進(jìn)行電泳（BioRad Mini Cell）。這樣電泳半個(gè)小時(shí)就可以進(jìn)行染色觀察了，雖然不直但是比你這個(gè)強(qiáng)多了。你跑的快一點(diǎn)試一下。
也肯能是膠本身的問(wèn)題，上面壓的時(shí)候不用ddH2O，換一個(gè)水飽和正丁醇封分離膠，我曾經(jīng)嘗試過(guò)，的確分里面很平，后來(lái)因?yàn)槲兜捞�，就不用了�?br /> 上面兩個(gè)方法同時(shí)嘗試看看是不是會(huì)好一些。

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14樓2016-01-23 10:17:46

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wyalin

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【答案】應(yīng)助回帖

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別加樣品，只跑溴酚藍(lán)，你再看看，就知道哪兒的問(wèn)題了

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15樓2016-01-23 12:11:34

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pandezhuo

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一個(gè)不小心就: 金幣+3 2016-01-23 13:45:22

如果你只是跑小膠，這么長(zhǎng)的時(shí)間肯定是有問(wèn)題。第一，檢查下分離膠和濃縮膠的濃度。第二，配膠的問(wèn)題，分離膠的凝固時(shí)間在十五分鐘到三十分鐘，分離膠灌好后要用70%乙醇封膠，這樣才能保證分離膠面成直線。配濃縮膠前，要降乙醇倒掉，用緩沖液洗兩遍后再灌濃縮膠。配好膠后最好過(guò)夜再用。第三，電泳時(shí)可以用恒壓也可以用恒流，我們是使用恒流，濃縮膠10mA，分離膠20mA，總共3個(gè)半小時(shí)。

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16樓2016-01-23 12:50:24

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10樓: Originally posted by swlsangon at 2016-01-22 16:33:19
上下層膠你在配的時(shí)候要壓膠。使界面平滑，然后可能是樣品沒(méi)有煮好。...

是跑的時(shí)間長(zhǎng)了造成的，我縮短了時(shí)間膠還是好的。只是條帶分的不是太開(kāi)

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17樓2016-01-23 13:42:43

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11樓: Originally posted by 川大太行 at 2016-01-22 19:51:52
我也覺(jué)得是跑的時(shí)間太長(zhǎng)了，你可以提高電壓縮短時(shí)間試試

原因如你所說(shuō)

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18樓2016-01-23 13:43:43

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引用回帖:

12樓: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2016-01-23 01:29:45
我的蛋白70kda, 一般120的電壓跑2個(gè)小時(shí)，我們用的是買(mǎi)來(lái)的梯度膠，不知道自己制的膠會(huì)怎么樣。但是我覺(jué)得60v 10h這個(gè)條件不太合適，以前國(guó)內(nèi)他們自己制的膠好像用150V還是200V跑的，我記不清楚了，但是肯定超過(guò)10 ...

嗯嗯，按你的建議試試

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19樓2016-01-23 13:44:16

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memorize1991

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膠上好后，先電泳一會(huì)兒再加樣，之前我也跑出一條斜線。

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20樓2016-01-23 15:09:58

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