 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3085 | 回復(fù): 17 | |||
王希lily新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
SDS-PAGE圖跑成這樣怎么辦呢？
|
||
|
最近一直在做蛋白，但是跑SDS-PAGE圖總是跑不好，按照剛開始認(rèn)為是樣品處理不好，就重新處理了幾次樣品，但是結(jié)果還是不理想，后來認(rèn)為是配膠的液體等有問題，就全部按照書上重新配了，但是結(jié)果還是遮樣，開始MARKER還能跑清楚，重新配了液后就連MARKER 條帶都跑不見了。請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的親們指點(diǎn)一下，謝謝了。 SDS-PAGE圖 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
一志愿中南化學(xué)337求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有23人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
279分求調(diào)劑 一志愿211
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
招收調(diào)劑碩士
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
296求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
招收博士1-2人
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
274求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 非還原SDS-PAGE電泳和還原SDS-PAGE電泳問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- SDS-PAGE圖求分析
已經(jīng)有13人回復(fù)
- SDS-PAGE跑膠圖求助
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 跑SDS-PAGE，跑完后沒有條帶，不知道是怎么回事
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 跑的非還原SDS-PAGE和還原SDS-PAGE
已經(jīng)有57人回復(fù)
- sds-page圖
已經(jīng)有3人回復(fù)
- SDS-PAGE圖
已經(jīng)有0人回復(fù)
- sds-page跑膠
已經(jīng)有11人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳圖
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求高手指點(diǎn)一哈SDS-PAGE圖
已經(jīng)有6人回復(fù)
惡魔的左眼
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 110 (高中生)
- 金幣: 2237.7
- 紅花: 20
- 帖子: 425
- 在線: 880.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 3705608
- 注冊(cè): 2015-03-03
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
王希lily: 金幣+2 2015-10-08 10:57:03
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
王希lily: 金幣+2 2015-10-08 10:57:03
|
重組蛋白表達(dá)純化目的蛋白質(zhì)條帶模糊的相應(yīng)對(duì)策 電泳凝膠濃度選擇不當(dāng)。 低于10Kd的小分子蛋白質(zhì)要用Tricine膠。 靠近前沿的電泳帶分辨率不佳。根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系，選擇適當(dāng)濃度的凝膠。 蛋白質(zhì)樣品水解。注意除去蛋白質(zhì)樣品的內(nèi)源性的水解酶，不要反復(fù)凍融。 電泳時(shí)間過長或過短。溴酚藍(lán)達(dá)到分離膠的底部即應(yīng)該關(guān)閉電泳電源。 緩沖溶液、SDS都要新鮮配制。 避免加樣過多，提高分辨率。小體積樣品可給出窄帶，加樣體積根據(jù)樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣體積為10-15uL（即2-10ug蛋白質(zhì)）。 加熱變性后的蛋白質(zhì)樣品要放置到室溫即電泳，不要久放，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的二硫鍵在高溫下可能是會(huì)斷開，但是暴露于空氣中溫度降低會(huì)重新形成二硫鍵，而且可能在過久放置過程中蛋白質(zhì)可能會(huì)再折疊，更不要扔到冰箱里保存。 摘自：http://www.detaibio.com/topics/sds-page-faq.html |
10樓2015-10-08 10:29:28
yangzeng1991
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 3461
- 散金: 369
- 紅花: 2
- 帖子: 294
- 在線: 203.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1958266
- 注冊(cè): 2012-08-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
2樓2015-10-07 18:40:31
sdjnyxn123
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 18.8
- 帖子: 82
- 在線: 83.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 3096694
- 注冊(cè): 2014-03-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
你的膠沒有點(diǎn)樣孔，是怎么點(diǎn)的樣啊3樓2015-10-08 08:44:24
4樓2015-10-08 08:55:59
dorecnu
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 31 (小學(xué)生)
- 金幣: 2336.7
- 紅花: 10
- 帖子: 785
- 在線: 93.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 448155
- 注冊(cè): 2007-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
王希lily: 金幣+1, 有道理 2015-10-08 10:16:09
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
王希lily: 金幣+1, 有道理 2015-10-08 10:16:09
|
第一張圖不太好，第二張圖尚可。 想要跑一張漂亮的SDS-PAGE圖可以改進(jìn)一下方面： 1. 上樣前使用nano-drop或其他方法測(cè)定樣品總蛋白量，使得每個(gè)孔上樣量一致且在最佳蛋白量范圍，圖會(huì)好看很多 2. 根據(jù)目標(biāo)蛋白大小選擇合適濃度的SDS-PAGE凝膠,小蛋白用15%左右的凝膠,一般大小蛋白使用10-12%濃度凝膠 3. 制作凝膠時(shí)濃縮膠與分離膠比例要合適,如果是新手把握不準(zhǔn)可以買預(yù)制膠 4. 電泳時(shí)使用小電壓電泳,并使垂直電泳槽置于0-4度環(huán)境(可以使用冰盒,也可以至于4度冷柜) 5. 使用預(yù)染marker，電泳時(shí)可以實(shí)時(shí)觀察marker電泳情況 6. 蛋白條帶分辨率不高，可以嘗試使用小孔梳子聚集蛋白，往往可以提高條帶分辨率 |
5樓2015-10-08 09:10:07
王希lily
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 582.9
- 散金: 3
- 帖子: 36
- 在線: 4.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3834615
- 注冊(cè): 2015-04-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
6樓2015-10-08 10:08:34
王希lily
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 582.9
- 散金: 3
- 帖子: 36
- 在線: 4.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3834615
- 注冊(cè): 2015-04-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
7樓2015-10-08 10:12:08
王希lily
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 582.9
- 散金: 3
- 帖子: 36
- 在線: 4.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3834615
- 注冊(cè): 2015-04-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
8樓2015-10-08 10:12:58
王希lily
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 582.9
- 散金: 3
- 帖子: 36
- 在線: 4.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3834615
- 注冊(cè): 2015-04-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
9樓2015-10-08 10:14:59
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 王希lily 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 14/700 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +3 | Charlieyq 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +14 | 陌の森林 2026-03-18 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級(jí)已過，有科研經(jīng)歷 +12 | 曦熙兮 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +3 | 葵梓衛(wèi)隊(duì) 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +5 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 0854，計(jì)算機(jī)類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|