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1121prettycat木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于MTT法吸光度值偏小 已有4人參與
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目前正在用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率，步驟是將培養(yǎng)液吸出后，加入200微升MTT，37°孵育3到4個(gè)小時(shí)，然后加入150微升DMSO，想問(wèn)一下大家用的檢測(cè)波長(zhǎng)和參考波長(zhǎng)都是多少，我目前用的是490nm的檢測(cè)波長(zhǎng)和650nm的測(cè)定波長(zhǎng)，現(xiàn)在用490nm得到的吸光度值包括對(duì)照都不到0.2，大約在0.17左右，650nm檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)大約都在0.05或者0.06，不知道吸光度值偏小是因?yàn)榉跤龝r(shí)間不夠還是與細(xì)胞有關(guān)，因?yàn)槭褂脛e的細(xì)胞的時(shí)候吸光度值都沒(méi)有這么小，想問(wèn)一下吸光度這么小數(shù)據(jù)能否使用？ 還有數(shù)據(jù)處理的時(shí)候是不是應(yīng)該用各孔在490nm檢測(cè)時(shí)得到的數(shù)值-650nm檢測(cè)時(shí)得到的數(shù)值？ |
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三磷酸腺苷
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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10樓2010-01-22 09:47:52
nicknelson
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2樓2010-01-08 11:28:32
★ ★ ★ ★
1121prettycat(金幣+1):謝謝參與
amisking(金幣+3,VIP+0): 1-8 17:28
1121prettycat(金幣+1):謝謝參與
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請(qǐng)問(wèn)你用的MTT是多大濃度的？怎么加200ul啊。 我用的MTT是2mg/ml的，每孔加50ul，（有的用5mg/ml，每孔加20ul），孵育3h后，加150ulDMSO溶解，用490nm和630nm測(cè)吸光值，也就是你說(shuō)的檢測(cè)波長(zhǎng)與參照波長(zhǎng)。 吸光值最好在0.2-0.8范圍內(nèi)，因?yàn)檫@個(gè)是最準(zhǔn)確的。你測(cè)得值小，可能與接種的細(xì)胞量有關(guān)，還有就是MTT的用量。 數(shù)據(jù)處理時(shí)是需要相減的，即A490-A630。 |
3樓2010-01-08 11:30:43
1121prettycat
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4樓2010-01-08 14:19:05
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