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1121prettycat木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于MTT法吸光度值偏小 已有4人參與
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目前正在用MTT法測定細(xì)胞存活率,步驟是將培養(yǎng)液吸出后,加入200微升MTT,37°孵育3到4個(gè)小時(shí),然后加入150微升DMSO,想問一下大家用的檢測波長和參考波長都是多少,我目前用的是490nm的檢測波長和650nm的測定波長,現(xiàn)在用490nm得到的吸光度值包括對照都不到0.2,大約在0.17左右,650nm檢測得到的數(shù)據(jù)大約都在0.05或者0.06,不知道吸光度值偏小是因?yàn)榉跤龝r(shí)間不夠還是與細(xì)胞有關(guān),因?yàn)槭褂脛e的細(xì)胞的時(shí)候吸光度值都沒有這么小,想問一下吸光度這么小數(shù)據(jù)能否使用? 還有數(shù)據(jù)處理的時(shí)候是不是應(yīng)該用各孔在490nm檢測時(shí)得到的數(shù)值-650nm檢測時(shí)得到的數(shù)值? |
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請問你用的MTT是多大濃度的?怎么加200ul啊。 我用的MTT是2mg/ml的,每孔加50ul,(有的用5mg/ml,每孔加20ul),孵育3h后,加150ulDMSO溶解,用490nm和630nm測吸光值,也就是你說的檢測波長與參照波長。 吸光值最好在0.2-0.8范圍內(nèi),因?yàn)檫@個(gè)是最準(zhǔn)確的。你測得值小,可能與接種的細(xì)胞量有關(guān),還有就是MTT的用量。 數(shù)據(jù)處理時(shí)是需要相減的,即A490-A630。 |
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