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lff20126206新蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助】Ni親和層析 雜蛋白與目的蛋白一同被洗脫 已有2人參與
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如題,用BL21表達(dá)蛋白,大小120KD,預(yù)測(cè)等電點(diǎn)為5.68。(PS:我掃描膠的效果不好,但能說明問題就行了) 細(xì)胞破碎液過鎳柱后洗雜蛋白,并用含咪唑(50,100,150, 200, 300, 500mM)的咪唑洗脫液洗脫,總是有雜蛋白在洗脫液里。圖中beas就是鎳柱,表明我的蛋白是掛在鎳柱上了。(PS:不知道為什么,誘導(dǎo)前后看不到我的目的蛋白表達(dá)量升高,之前小量誘導(dǎo)的時(shí)候,確定該蛋白能被誘導(dǎo)。) 嘗試了用500mMNaCl洗脫(不含咪唑)雜蛋白,發(fā)洗脫中的雜帶并未改善。 請(qǐng)教各位大俠,有什么辦法可以解決這個(gè)問題? 圖片1.png@gyesang@hc-material |
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (小有名氣)
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學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC,還能修改嗎?
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