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lff20126206新蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助】Ni親和層析 雜蛋白與目的蛋白一同被洗脫 已有2人參與
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如題，用BL21表達(dá)蛋白，大小120KD，預(yù)測等電點為5.68。（PS：我掃描膠的效果不好，但能說明問題就行了） 細(xì)胞破碎液過鎳柱后洗雜蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脫液洗脫，總是有雜蛋白在洗脫液里。圖中beas就是鎳柱，表明我的蛋白是掛在鎳柱上了。（PS：不知道為什么，誘導(dǎo)前后看不到我的目的蛋白表達(dá)量升高，之前小量誘導(dǎo)的時候，確定該蛋白能被誘導(dǎo)。） 嘗試了用500mMNaCl洗脫（不含咪唑）雜蛋白，發(fā)洗脫中的雜帶并未改善。 請教各位大俠，有什么辦法可以解決這個問題？ 圖片1.png@gyesang@hc-material |
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wuhu0612331
銅蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
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首先120kd蛋白在大腸桿菌里表達(dá)本來就有難度，表達(dá)量低是肯定的，按照市面上鎳柱的吸附能力一般都能達(dá)到1ml20mg以上，當(dāng)你的目的蛋白減少時，其他雜蛋白和柱子的非特異性結(jié)合也隨著增高，可以多表達(dá)一些，按比例少用點柱料，裂解液里加10mm咪唑試試�？梢詤⒖家幌�。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
14樓2017-04-15 16:37:19
lff20126206
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2樓2017-04-13 14:45:10
lff20126206
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3樓2017-04-13 17:15:59
 本帖僅樓主可見 |
5樓2017-04-13 17:36:34
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