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lff20126206新蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助】Ni親和層析 雜蛋白與目的蛋白一同被洗脫 已有2人參與
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如題，用BL21表達蛋白，大小120KD，預測等電點為5.68。（PS：我掃描膠的效果不好，但能說明問題就行了） 細胞破碎液過鎳柱后洗雜蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脫液洗脫，總是有雜蛋白在洗脫液里。圖中beas就是鎳柱，表明我的蛋白是掛在鎳柱上了。（PS：不知道為什么，誘導前后看不到我的目的蛋白表達量升高，之前小量誘導的時候，確定該蛋白能被誘導。） 嘗試了用500mMNaCl洗脫（不含咪唑）雜蛋白，發(fā)洗脫中的雜帶并未改善。 請教各位大俠，有什么辦法可以解決這個問題？ 圖片1.png@gyesang@hc-material |
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yxncas-2012
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鎳柱純化效果沒有理想中那么好，一般后續(xù)還要跟離子柱和分子篩。鎳柱一般都是高鹽上樣，減少特異性吸附。接離子柱的時候電導盡量稀釋到低一些。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
16樓2017-04-15 23:07:55
lff20126206
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2樓2017-04-13 14:45:10
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3樓2017-04-13 17:15:59
 本帖僅樓主可見 |
5樓2017-04-13 17:36:34
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