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求助SDS-PAGE電泳中的相關(guān)問(wèn)題
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我最近在做IPTG誘導(dǎo)，想通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)一下是否成功誘導(dǎo)出蛋白。但是在電泳過(guò)程中遇到一些問(wèn)題，還請(qǐng)各位指教，謝謝。 我的目的蛋白大小在50kDa到70kDa之間，配膠是買(mǎi)的索萊寶公司的凝膠試劑盒，根據(jù)試劑盒中的說(shuō)明書(shū)，選用的是5%的濃縮膠和10%的分離膠。電泳過(guò)程中遇到的問(wèn)題如下： 1 上層濃縮膠灌入玻璃板并插入梳子之后，在濃縮膠層會(huì)出現(xiàn)與梳齒寬度相似的一條條不均勻豎條紋，請(qǐng)問(wèn)是什么原因呢？ 2 電泳接通電源之后，我先是用140V跑濃縮膠，然后用200V跑分離膠。但是跑出來(lái)的條帶是斜著下來(lái)的（下面有照片）。 3 不光帶是斜著跑下來(lái)的，15個(gè)膠孔每個(gè)孔都不是水平跑下來(lái)的，有的快，有的慢，這個(gè)正常嗎？我一共是5個(gè)樣本，其他的膠孔上的是與樣本等體積的1×protein buffer 。很明顯，5個(gè)樣本跑的速度比其他上了1×protein buffer 跑出來(lái)的速度要快。 4 所有的條帶都不是水平線，每一個(gè)膠孔上的樣品都很亂，似乎不是很均勻，這個(gè)也是不正常的吧？ 5 這個(gè)SDS-PAGE電泳我在北大實(shí)驗(yàn)室做的時(shí)候都沒(méi)有出現(xiàn)以上這些問(wèn)題。在北大實(shí)驗(yàn)室用的制膠試劑、電泳槽、電泳儀都與我們實(shí)驗(yàn)室的不同。（另外，北大實(shí)驗(yàn)室做的SDS-PAGE電泳自始至終電壓都是200V，用200V的電壓跑1h即可。我也試了一下，可是跑出來(lái)的帶還是那個(gè)樣子）如下圖最后一張圖片，是在北大實(shí)驗(yàn)室做的PAGE電泳圖條帶整齊劃一，前面4張是我在本實(shí)驗(yàn)室做的電泳圖片，條帶層次不齊 還請(qǐng)各位前輩能給我一些建議，希望各位多多指教，謝謝大家 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 [ Last edited by 零星公寓 on 2017-9-18 at 21:00 ] |
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