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清嗓金聲
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[求助]
目的基因連到克隆載體和表達(dá)載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌后克隆均長(zhǎng)的少? 已有1人參與
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如題,目的基因?qū)儆谵D(zhuǎn)運(yùn)蛋白(跨膜)基因, 2k的基因連到克隆載體,重組表達(dá)載體均順利,轉(zhuǎn)化大腸桿菌克隆較多。陽性率也可以,轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌也長(zhǎng)的較多,陽性率高。 同一個(gè)家族的基因,同時(shí)做轉(zhuǎn)化,4k多的基因在克隆載體表達(dá)載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌克隆<10個(gè),陽性率低或無陽性。轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌不長(zhǎng)克隆。排除感受態(tài)及轉(zhuǎn)化問題。有人說可能是基因有毒性?怎么理解基因毒性?試過平板放30度,培養(yǎng)基加葡萄糖,均不奏效。還有可能是什么原因? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲 (著名寫手)
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額,這里面原因太多了,目的基因和載體的酶切效果,連接體系的比例等等,本身大片段連接轉(zhuǎn)化較小片段效率低一些,你是轉(zhuǎn)化大腸桿菌后提質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌么?還是連接后同時(shí)轉(zhuǎn)化兩個(gè)菌? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

銅蟲 (初入文壇)
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提完質(zhì)粒轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌。不是,我大片段也有重組上的,但是長(zhǎng)的少,陽性少,把陽性克隆保存菌種再活化凃板還是長(zhǎng)一兩個(gè)克隆。有的搖菌也搖的慢。還有一個(gè)片段擴(kuò)出來了死活重組不上,悲劇。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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