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清嗓金聲
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[求助]
目的基因連到克隆載體和表達(dá)載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌后克隆均長的少？ 已有1人參與
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如題，目的基因?qū)儆谵D(zhuǎn)運(yùn)蛋白（跨膜）基因， 2k的基因連到克隆載體，重組表達(dá)載體均順利，轉(zhuǎn)化大腸桿菌克隆較多。陽性率也可以，轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌也長的較多，陽性率高。 同一個(gè)家族的基因，同時(shí)做轉(zhuǎn)化，4k多的基因在克隆載體表達(dá)載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌克隆<10個(gè)，陽性率低或無陽性。轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌不長克隆。排除感受態(tài)及轉(zhuǎn)化問題。有人說可能是基因有毒性？怎么理解基因毒性？試過平板放30度，培養(yǎng)基加葡萄糖，均不奏效。還有可能是什么原因？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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原海亮
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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額，這里面原因太多了，目的基因和載體的酶切效果，連接體系的比例等等，本身大片段連接轉(zhuǎn)化較小片段效率低一些，你是轉(zhuǎn)化大腸桿菌后提質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌么？還是連接后同時(shí)轉(zhuǎn)化兩個(gè)菌？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-03-08 19:08:31
清嗓金聲 
銅蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
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提完質(zhì)粒轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌。不是，我大片段也有重組上的，但是長的少，陽性少，把陽性克隆保存菌種再活化凃板還是長一兩個(gè)克隆。有的搖菌也搖的慢。還有一個(gè)片段擴(kuò)出來了死活重組不上，悲劇。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-03-09 09:28:49
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