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PCR到qPCR的問題 已有1人參與
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土壤DNA提取完后進(jìn)行了普通PCR和凝膠成像,下一步想做qPCR,請問中間還要有哪些過渡實(shí)驗(yàn)嗎?比如PCR產(chǎn)物純化,目的基因克隆,質(zhì)粒提取,測序等,是必須要做的嗎?能不能用提取的DNA直接做qPCR?新手求指教? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (小有名氣)
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要看想要的結(jié)果是什么,直接做,設(shè)置內(nèi)參做相對定量。還是構(gòu)建標(biāo)曲做絕對定量。土壤DNA大多含有雜質(zhì),視提取結(jié)果看是否純化。余下都是常規(guī)操作,一搜一大把操作路線。但首先要明白,自己想要的結(jié)果是什么 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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片段是在160到210bp之間的,應(yīng)該符合要求。但是普通PCR凝膠成像顯示出條帶后,不是還要進(jìn)行測序才能進(jìn)一步確定目的基因嗎?測序的話就要進(jìn)行質(zhì)粒提取,不還是要進(jìn)行中間的那幾步嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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想要得到的結(jié)果是得出目的基因的相對豐度,我看有些文章說是用相對定量,但是也提取質(zhì)粒做了標(biāo)準(zhǔn)曲線。基因相對豐度是樣本中目的基因的決對拷貝數(shù)/內(nèi)參基因16S-rRNA絕對拷貝數(shù),這是相對定量嗎?是不是文章中寫錯(cuò)了嗎?? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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